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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于镍柱纯化蛋白
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viki_MDK

银虫 (正式写手)

[求助] 关于镍柱纯化蛋白

我蛋白样品挂镍柱后，，用含200mM米错液洗脱，这样米错不是挂在镍柱上了吗，下次使用时。我的样品怎么还能在挂上去？
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sweetcrystal

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1楼2012-05-25 12:53:42
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励 2012-05-25 19:07:50
（咪唑在215nm有较高的吸收）咪唑洗脱完后用水冲，开始在215nm的吸收会很高的，用水多冲会，紫外吸收会降下，说明咪唑冲干净了。
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3楼2012-05-25 13:57:53
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-25 19:07:43
把柱子再生一下就是了，亲和的我没有做过，但是离子交换的，在做完以后，都要用NAOH溶液冲洗，你看看说明吧
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2楼2012-05-25 13:45:32
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

用咪唑洗脱的Ni柱是可重复使用几次之后再重新挂Ni再生的。
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4楼2012-05-25 14:03:56
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good！ 2012-05-25 19:08:04
目标蛋白洗脱下来后，柱子需要再生：
再生步骤
1，10倍stripping buffer(洗除残留的NI)
2，10倍的binding
3,10倍的水
4，10倍0.1M的硫酸镍
5，10倍水
6,10倍binding buffer
7,10倍水
20%的乙醇保存（10倍）
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nothing isimpossible
5楼2012-05-25 14:12:14
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