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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 麻烦大家给我分析一下电泳图

急!!!这是我新构建的质粒分别提取质粒和酶切后跑的电泳,但是跑出来的带很奇怪。这次提取的质粒是直接从以前培养的平板上挑的单菌落,然后摇菌过夜,用TIGEN试剂盒提取的。之前已经做过验证结果都挺好的。由于我要将这个构建好的质粒转入革兰氏阳性菌中,而最近转了好几批都没转进去,想知道出现这样的结果是为什么?

这个是新提的质粒做的酶切。1泳道是Marker,大小从下到上分别是:250-500-750-1000-1500-2000-2500-3000-3500-4000-5000-6000-8000-10000,2泳道是提取的质粒,大小应该是7100bp,3泳道是我酶切的结果,本来应该是两条带,分别是2700bp和4500bp,但是却切出来三条带,这是为什么呀?



这是我之前体制里做的酶切验证,marker和前面的一样。第3泳道是我酶切的结果。但是质粒是我用自己配的碱裂解液提取的,所以下面有很亮的带。我想知道用手提的质粒做电转老是转不进去,会不会是因为受下面那个亮带的影响。
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 冰岩8625 at 2012-05-25 20:21:00
1.质粒跑出来的电流明显不对,http://wenku.baidu.com/view/e352aa868762caaedd33d4de.html你可以参考一下。
2.但是酶切图中目的片断都有,只是中间多了一道,或许是没有切完全的质粒。(用别的酶切一下,看看有没 ...

嗯,谢谢,我又重新提了一次,酶切也减少了质粒的量,这次跑出来的电泳比上次好多了。希望用新提取的质粒电转能成功吧。
5楼2012-05-30 13:55:13
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)

第一个图:第二个泳道,你的质粒这么多条带,比较奇怪。。。至于酶切出3条带的话,你减少下酶切的质粒量试试,我不能确定。不过我认为质粒问题不大。第二个图:电转的话,质粒最好弄的纯净点,还有最后用弱碱性的去离子水溶解。祝你实验成功~
2楼2012-05-25 11:42:09
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-25 20:33:59
1.你提的质粒有问题,菌落PCR结果如何?单酶切下,我是觉得你的革兰氏阳性菌有问题。
3楼2012-05-25 19:02:42
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冰岩8625

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-25 20:33:53
1.质粒跑出来的电流明显不对,http://wenku.baidu.com/view/e352aa868762caaedd33d4de.html你可以参考一下。
2.但是酶切图中目的片断都有,只是中间多了一道,或许是没有切完全的质粒。(用别的酶切一下,看看有没有目的片断)
3..会不会是污染了别的质粒。以前构建的质粒有保存大肠杆菌宿主菌吧,建议重新划线,再挑单菌落。后重新提质粒。可以挑三四个同时做对比。
4楼2012-05-25 20:21:00
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