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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 麻烦大家给我分析一下电泳图
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)

[求助] 麻烦大家给我分析一下电泳图

急！！！这是我新构建的质粒分别提取质粒和酶切后跑的电泳，但是跑出来的带很奇怪。这次提取的质粒是直接从以前培养的平板上挑的单菌落，然后摇菌过夜，用TIGEN试剂盒提取的。之前已经做过验证结果都挺好的。由于我要将这个构建好的质粒转入革兰氏阳性菌中，而最近转了好几批都没转进去，想知道出现这样的结果是为什么?

这个是新提的质粒做的酶切。1泳道是Marker，大小从下到上分别是：250-500-750-1000-1500-2000-2500-3000-3500-4000-5000-6000-8000-10000，2泳道是提取的质粒，大小应该是7100bp，3泳道是我酶切的结果，本来应该是两条带，分别是2700bp和4500bp，但是却切出来三条带，这是为什么呀？



这是我之前体制里做的酶切验证，marker和前面的一样。第3泳道是我酶切的结果。但是质粒是我用自己配的碱裂解液提取的，所以下面有很亮的带。我想知道用手提的质粒做电转老是转不进去，会不会是因为受下面那个亮带的影响。
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1楼2012-05-25 11:03:08
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)
第一个图：第二个泳道，你的质粒这么多条带，比较奇怪。。。至于酶切出3条带的话，你减少下酶切的质粒量试试，我不能确定。不过我认为质粒问题不大。第二个图：电转的话，质粒最好弄的纯净点，还有最后用弱碱性的去离子水溶解。祝你实验成功~
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2楼2012-05-25 11:42:09
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-25 20:33:59
1.你提的质粒有问题，菌落PCR结果如何？单酶切下，我是觉得你的革兰氏阳性菌有问题。
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3楼2012-05-25 19:02:42
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冰岩8625

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-25 20:33:53
1.质粒跑出来的电流明显不对，http://wenku.baidu.com/view/e352aa868762caaedd33d4de.html你可以参考一下。
2.但是酶切图中目的片断都有，只是中间多了一道，或许是没有切完全的质粒。（用别的酶切一下，看看有没有目的片断）
3..会不会是污染了别的质粒。以前构建的质粒有保存大肠杆菌宿主菌吧，建议重新划线，再挑单菌落。后重新提质粒。可以挑三四个同时做对比。
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4楼2012-05-25 20:21:00
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冰岩8625 at 2012-05-25 20:21:00
1.质粒跑出来的电流明显不对，http://wenku.baidu.com/view/e352aa868762caaedd33d4de.html你可以参考一下。
2.但是酶切图中目的片断都有，只是中间多了一道，或许是没有切完全的质粒。（用别的酶切一下，看看有没 ...

嗯，谢谢，我又重新提了一次，酶切也减少了质粒的量，这次跑出来的电泳比上次好多了。希望用新提取的质粒电转能成功吧。
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5楼2012-05-30 13:55:13
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyy_zzz at 2012-05-25 11:42:09
第一个图：第二个泳道，你的质粒这么多条带，比较奇怪。。。至于酶切出3条带的话，你减少下酶切的质粒量试试，我不能确定。不过我认为质粒问题不大。第二个图：电转的话，质粒最好弄的纯净点，还有最后用弱碱性的去 ...

嗯，谢谢！我已经重新提了质粒了，之前是用自己配的试剂提的，所以下面有很亮的带，这次改用试剂盒提的，就没有杂带了。
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6楼2012-05-30 13:58:10
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淡竹2066

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by jimmy7633 at 2012-05-25 19:02:42
1.你提的质粒有问题，菌落PCR结果如何？单酶切下，我是觉得你的革兰氏阳性菌有问题。

做过菌落PCR，没有问题。
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7楼2012-05-30 13:58:46
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不鸣鸟

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

有没有人知道第二图第三泳道那条很亮的带是怎么来的，我是提质粒没有酶切时也跑出两条带，一条是质粒，还有一条就是在一二百bp大小附近那条很亮的带，这是怎么回事
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8楼2012-08-03 19:07:57
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