| 查看: 2657 | 回复: 19 | |||
[求助]
请教各位大侠：双向电泳蛋白定量用bradford法的问题！！
|
|
双向电泳提肌肉蛋白，提完后用bradford方法测蛋白浓度，但包括标准曲线在内，值不停变动，不知道问题出在哪里，求救！具体方法如下： 用蒸馏水配1mg/ml BSA，各试管分别加入0，10ul，20ul，40ul，60ul，80ul，100ul，用裂解液补齐到100ul。之所以用裂解液，是因为样品是用裂解液溶的，而且裂解液中含有8M的尿素，居然尿素也要跟考马斯亮蓝反应。再加入5ml 考马斯亮蓝，用过试剂盒里的考马斯亮蓝，也自己配过。混匀后立即测，也做过5min后测，10min后测，但在595nm下吸光值不断增大，不稳定。 不知道各位有没有碰到类似的情况？是什么原因造成的呢？这样测出来的蛋白浓度不敢相信啊，只能估测个大概，但后面做双向电泳，是不是还是应该比较准确地定量呢，因为后面结果分析里面，蛋白点差异1.5倍就算是差异蛋白了，如果定量不准确的话，如果是上样原因造成的，那可如何是好啊！由于上样引起的差异是不是可以在后面用软件去掉？ 另，做双向电泳的同学都是用什么方法定量的呢？ 刚开始做，很菜鸟，忘各位不吝赐教，万分感激！ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
xiucai_2012» 猜你喜欢
一志愿华东师范生物学326分，求调剂
已经有4人回复
-
071000生物学调剂求助
已经有11人回复
-
化学工程与技术324调剂
已经有16人回复
-
298求调剂
已经有4人回复
-
282，求调剂
已经有9人回复
-
考研调剂
已经有19人回复
-
308求调剂
已经有20人回复
-
中科院总分315求调剂
已经有3人回复
-
求调剂 材料与工程 324分 专硕
已经有3人回复
-
一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 双向电泳条纹等问题求助
已经有15人回复
- 跑植物叶片蛋白的双向电泳 需要点Mark吗 多大分子量的啊 还有 多大的胶条可以啊
已经有22人回复
- 双向电泳，等电聚焦后，胶条酸端，总是能看到白色蛋白，这该怎么解决啊 ？？？？
已经有6人回复
- 蛋白质定量技术--BCA 和bradford法比较
已经有3人回复
- Ebook__《双向电泳原理与方法》第三版
已经有281人回复
- 请教大家关于双向电泳的问题~
已经有4人回复
- 我想从油滴中富集分泌出的蛋白质，已达到做双向电泳所需的上样量，有什么方法？谢谢。
已经有5人回复
- 双向电泳，蛋白样品除盐有用透析的吗？好操作吗？
已经有8人回复
- 双向电泳，蛋白定量测定用方法的讨论
已经有14人回复
- 双向电泳，刚提出来的总蛋白，在裂解液里可以4度放多久啊？
已经有12人回复
- 双向电泳提总蛋白，如何除盐啊？
已经有10人回复
- 关于SDS-PAGE与双向电泳的请教
已经有6人回复
- 双向电泳 蛋白纯化
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于Bradford法测蛋白含量的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】考马斯亮兰法（Bradford法）测定蛋白浓度事宜请教！
已经有7人回复
Rubisco580
金虫 (小有名气)
- BioEPI: 4
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 997.7
- 红花: 7
- 帖子: 264
- 在线: 48.5小时
- 虫号: 553802
- 注册: 2008-05-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2012-05-24 10:55:18
xhjggl
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2889.3
- 散金: 150
- 红花: 7
- 帖子: 556
- 在线: 190.9小时
- 虫号: 95496
- 注册: 2005-10-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2012-05-24 11:34:34
4楼2012-05-24 14:16:51
5楼2012-05-24 14:31:25
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
6楼2012-05-24 16:32:33
7楼2012-05-24 23:40:40
colorfulmiao
木虫 (小有名气)
- 应助: 16 (小学生)
- 金币: 1965.3
- 散金: 100
- 红花: 9
- 帖子: 153
- 在线: 72.3小时
- 虫号: 1548678
- 注册: 2011-12-23
- 专业: 食品科学基础
8楼2012-05-25 11:05:37
S0817010
金虫 (正式写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1234.1
- 散金: 100
- 红花: 2
- 帖子: 547
- 在线: 51小时
- 虫号: 1230121
- 注册: 2011-03-12
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
9楼2012-05-25 16:18:21
10楼2012-05-25 16:25:45
