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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教各位大侠：双向电泳蛋白定量用bradford法的问题！！
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S0817010

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
wsw2t: 金币+1, ★有帮助, 谢谢，主要我这个双向的样品有尿素干扰，之讨厌哦 2012-05-26 11:45:27
wsw2t: 金币+1, ★有帮助 2012-08-24 10:21:22
测蛋白浓浓方法比较多，最简单的紫外A280（适用于已知氨基酸序列的蛋白）以及经验公式1.45A280-0.74A260。其次较普通的是你用的方法和BCA法，再有是Lowry法，定氮法，楼主可试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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做个秒针，也挺好的
11楼2012-05-26 07:58:37
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用 bca定量吧   干扰小
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12楼2012-05-26 21:56:04
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Mercury523

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
wsw2t: 金币+2, ★有帮助 2012-08-24 10:21:43
用裂解液配制蛋白标样，然后考马斯亮蓝配好后要过滤，在加入各个试剂的时候注意换枪头。另外，加入试剂的时候注意贴壁，不要太剧烈，由于是微量加样，加入试剂太剧烈反而会使样品分布不均。
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13楼2012-06-05 10:34:37
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

我们都是用水稀释的，样品里的裂解液也会影响该法对蛋白的定量吧，你可以考虑下将样品脱盐后测个浓度比较一下。
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14楼2012-06-05 15:22:36
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wsw2t

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by linyingjia at 2012-05-26 21:56:04
用 bca定量吧   干扰小

谢谢！
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15楼2012-06-13 10:18:01
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wsw2t

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by Mercury523 at 2012-06-05 10:34:37
用裂解液配制蛋白标样，然后考马斯亮蓝配好后要过滤，在加入各个试剂的时候注意换枪头。另外，加入试剂的时候注意贴壁，不要太剧烈，由于是微量加样，加入试剂太剧烈反而会使样品分布不均。

谢谢！
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16楼2012-06-13 10:18:39
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wsw2t

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by kedaxiaoyu at 2012-06-05 15:22:36
我们都是用水稀释的，样品里的裂解液也会影响该法对蛋白的定量吧，你可以考虑下将样品脱盐后测个浓度比较一下。

恩，正在解决，谢谢！
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17楼2012-06-13 10:18:54
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

8M的尿素貌似真的有点高啊！多稀释一下影响因素会减少，每个样至少测三次取平均值会准点。
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18楼2012-06-13 16:13:44
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
引用回帖:
7楼: Originally posted by 赵效冬 at 2012-05-24 23:40:40
我们用碧云天的bradford试剂盒不用等的啊，加完样就可以测的，不过也不准的，裂解液里的成分对各种测定方法都有影响的，不过好多文献都是用bradford的

我们就用的beyotime的蛋白定量试剂盒啊，蛋白样品用0.9%NaCl溶解的，连CK都在不断减小的！！怎么一回事啊？？老师说只用读第一个值，感觉好不靠谱，比色皿又少，测蛋白很是憋屈
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Dripping Concentrated!!energetic and active！
19楼2012-09-07 23:48:03
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xiucai_2012

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
我用的是去离子水，考马斯亮蓝再配的时候要过滤，我直接用的是水化液，会反应吗？我感觉相关系数还挺好的啊。
如果有可以跑小板的话买点蛋白质marker，跑个小板的SDS-PAGE，既可以检测浓度，又可以检测纯度
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20楼2012-12-21 22:53:50
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