| 查看: 3087 | 回复: 19 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
请教各位大侠：双向电泳蛋白定量用bradford法的问题！！
|
||
|
双向电泳提肌肉蛋白，提完后用bradford方法测蛋白浓度，但包括标准曲线在内，值不停变动，不知道问题出在哪里，求救！具体方法如下： 用蒸馏水配1mg/ml BSA，各试管分别加入0，10ul，20ul，40ul，60ul，80ul，100ul，用裂解液补齐到100ul。之所以用裂解液，是因为样品是用裂解液溶的，而且裂解液中含有8M的尿素，居然尿素也要跟考马斯亮蓝反应。再加入5ml 考马斯亮蓝，用过试剂盒里的考马斯亮蓝，也自己配过。混匀后立即测，也做过5min后测，10min后测，但在595nm下吸光值不断增大，不稳定。 不知道各位有没有碰到类似的情况？是什么原因造成的呢？这样测出来的蛋白浓度不敢相信啊，只能估测个大概，但后面做双向电泳，是不是还是应该比较准确地定量呢，因为后面结果分析里面，蛋白点差异1.5倍就算是差异蛋白了，如果定量不准确的话，如果是上样原因造成的，那可如何是好啊！由于上样引起的差异是不是可以在后面用软件去掉？ 另，做双向电泳的同学都是用什么方法定量的呢？ 刚开始做，很菜鸟，忘各位不吝赐教，万分感激！ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
xiucai_2012» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
kedaxiaoyu
木虫 (职业作家)
神虫浮云
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 4809.5
- 散金: 776
- 红花: 19
- 沙发: 110
- 帖子: 3858
- 在线: 2108.7小时
- 虫号: 1675631
- 注册: 2012-03-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
14楼2012-06-05 15:22:36
Rubisco580
金虫 (小有名气)
- BioEPI: 4
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 997.7
- 红花: 7
- 帖子: 264
- 在线: 48.5小时
- 虫号: 553802
- 注册: 2008-05-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2012-05-24 10:55:18
xhjggl
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 43 (小学生)
- 金币: 2889.3
- 散金: 150
- 红花: 7
- 帖子: 556
- 在线: 190.9小时
- 虫号: 95496
- 注册: 2005-10-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2012-05-24 11:34:34
4楼2012-05-24 14:16:51
25
