[交流] 酰胺酶的筛选方法

5楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-05-15 14:20:21
用茚三酮显色法我们考虑过，具体是在一个文献上看到的，将构建的基因文库转化涂平板，在用沾有底物的滤纸沾平板上的菌落，使其反应一段时间后再用该滤纸沾用茚三酮湿润的滤纸，但结果是所有的印迹都显色。分析原因 ...

6楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-09-11 23:18:10
你好，我现在找到了一个针对我的底物和酶活性反应的颜色反应，但是又没有一种快捷的办法筛选出阳性克隆。难道要一个一个挑去单菌落，进行一个一颜色反应，这样做工作量是不是太大了。不知您能否提供一个有效的方法 ...

9楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-09-13 15:54:01
谢谢你...

4楼: Originally posted by gjs713 at 2012-05-14 22:50:03:
有一个较为常规的方法不知道楼主是否考虑过，采用茚三酮反应来进行筛选，大规模初筛可以通过纸层析或在96孔板上进行。。

4楼: Originally posted by gjs713 at 2012-05-14 22:50:03
有一个较为常规的方法不知道楼主是否考虑过，采用茚三酮反应来进行筛选，大规模初筛可以通过纸层析或在96孔板上进行。。

7楼: Originally posted by gjs713 at 2012-09-12 22:09:50
不好意思，可能之前因为帖子太多的缘故漏掉了你这个回复。
最近在看文献的过程中看到这么一篇Appl Microbiol Biotechnol 的文章
来自于上海华东理工的许建和团队
He Y-C, Ma C-L, Xu J-H, Zhou L (2011) A high ...

8楼: Originally posted by gjs713 at 2012-09-12 22:11:17
我们这边有做文库的还真这么干， 这个工作的价值很大一部分可能就体现在工作量上，当然是在能筛选到较好的克隆的前提下。
有一个博士课题一个一个挑，筛选了上万个克隆。。。...

7楼: Originally posted by gjs713 at 2012-09-12 22:09:50
不好意思，可能之前因为帖子太多的缘故漏掉了你这个回复。
最近在看文献的过程中看到这么一篇Appl Microbiol Biotechnol 的文章
来自于上海华东理工的许建和团队
He Y-C, Ma C-L, Xu J-H, Zhou L (2011) A high ...

11楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-10-30 16:49:26
您在基因文库方面应该很有经验吧，现在老板想让我一个一个挑单菌落去筛选。我想问您几个问题：
1：您说的这个博士筛菌筛了多长时间？最后筛到阳性克隆了吗？因为我现在研二了，怕时间不够，到时候做不完？
2：您 ...

13楼: Originally posted by gjs713 at 2012-10-31 14:24:49
1 这个博士是我们隔壁实验室的 已经毕业了多年了。他做的酶比较难筛  估计做了一年吧。你是刚进研二 还是 研二已经结束了？时间问题要考虑。
2 是96孔板
3 可以的，最后可以做亚克隆
4 嗯 是的。但是这样还得做 ...

14楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-10-31 16:42:55
我刚进研二，应该还有一年时间吧。
您说“但是这样还得做一次表达，增加了一倍工作量。“是说用克隆载体做完构建好文库后，还要把片段切下来，连接到表达载体上，导入表达细胞进行表达吗？还是直接加诱导剂就可以 ...