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hraikeyan

金虫 (小有名气)


[交流] 酰胺酶的筛选方法

各位大侠,最近我要构建一个酰胺酶的筛选方法。基因组文库都比较好建立,就是没有一个高效有效的筛选方法,不知有没有谁做过这方面的研究,能否指点一二。
ps:底物为内酰胺,被酶水解后变为氨基酸
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hraikeyan

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by gjs713 at 2012-09-12 22:09:50
不好意思,可能之前因为帖子太多的缘故漏掉了你这个回复。
最近在看文献的过程中看到这么一篇Appl Microbiol Biotechnol 的文章
来自于上海华东理工的许建和团队
He Y-C, Ma C-L, Xu J-H, Zhou L (2011) A high ...

谢谢你
9楼2012-09-13 15:54:01
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查看全部 15 个回答

huangju0305

新虫 (初入文坛)


★ ★ ★
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:45:45
你的问题有点模糊,你想通过测定酶活来筛选这个酰胺酶吗?如果是的话,那么可以从底物的变化和生成的氨基酸来检测酶活。前提是底物是有特定紫外吸光值,或将生成的氨基酸衍生化进行荧光检测。一点拙见,还望各位大侠指教。
2楼2012-05-14 09:22:25
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shenlin0514

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:45:55
你可以做一个酶偶联筛选方案,即你的目的酶蛋白将内酰胺水解后生成特定的氨基酸后,再使用该氨基酸特异性催化酶进行反应,生成某种能够产生显色反应或是能与NADH等指示试剂产生反应,就可以进行筛选。
不过筛选方法最重要的稳定性和重复性,即对于同一个蛋白质使用该筛选方法需使CV小于等于10%,否则没有意义。
3楼2012-05-14 10:33:34
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)



hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
有一个较为常规的方法不知道楼主是否考虑过,采用茚三酮反应来进行筛选,大规模初筛可以通过纸层析或在96孔板上进行。。
4楼2012-05-14 22:50:03
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