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hraikeyan

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[交流] 酰胺酶的筛选方法

各位大侠，最近我要构建一个酰胺酶的筛选方法。基因组文库都比较好建立，就是没有一个高效有效的筛选方法，不知有没有谁做过这方面的研究，能否指点一二。
ps：底物为内酰胺，被酶水解后变为氨基酸

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1楼 2012-05-12 21:27:22

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hraikeyan

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引用回帖:

8楼: Originally posted by gjs713 at 2012-09-12 22:11:17
我们这边有做文库的还真这么干，这个工作的价值很大一部分可能就体现在工作量上，当然是在能筛选到较好的克隆的前提下。
有一个博士课题一个一个挑，筛选了上万个克隆。。。...

您在基因文库方面应该很有经验吧，现在老板想让我一个一个挑单菌落去筛选。我想问您几个问题：
1：您说的这个博士筛菌筛了多长时间？最后筛到阳性克隆了吗？因为我现在研二了，怕时间不够，到时候做不完？
2：您们是用96孔板做的吗？
3：我的目标基因片段应该在1500bp左右，回收2-9kb的基因片段可以吗？
4：我是根据酶活筛选的，但是一些根据活性筛选的基因文库的文献中采用puc19做载体，DH5α做宿主，这些不是克隆载体和克隆用的感受态吗？能用来做活性筛选用吗？
问题有些多，谢谢啦！如果有问题还得请教啊！
好人~~~