应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 酰胺酶的筛选方法
51/1返回列表
查看: 1534  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

[交流] 酰胺酶的筛选方法

各位大侠，最近我要构建一个酰胺酶的筛选方法。基因组文库都比较好建立，就是没有一个高效有效的筛选方法，不知有没有谁做过这方面的研究，能否指点一二。
ps：底物为内酰胺，被酶水解后变为氨基酸
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-05-12 21:27:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by gjs713 at 2012-09-12 22:09:50
不好意思，可能之前因为帖子太多的缘故漏掉了你这个回复。
最近在看文献的过程中看到这么一篇Appl Microbiol Biotechnol 的文章
来自于上海华东理工的许建和团队
He Y-C, Ma C-L, Xu J-H, Zhou L (2011) A high ...

您在基因文库方面应该很有经验吧，现在老板想让我一个一个挑单菌落去筛选。我想问您几个问题：
1：您说的这个博士筛菌筛了多长时间？最后筛到阳性克隆了吗？因为我现在研二了，怕时间不够，到时候做不完？
2：您们是用96孔板做的吗？
3：我的目标基因片段应该在1500bp左右，回收2-9kb的基因片段可以吗？
4：我是根据酶活筛选的，但是一些根据活性筛选的基因文库的文献中采用puc19做载体，DH5α做宿主，这些不是克隆载体和克隆用的感受态吗？能用来做活性筛选用吗？
问题有些多，谢谢啦！如果有问题还得请教啊！
好人~~~
赞一下 回复此楼
12楼2012-10-31 12:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

huangju0305

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:45:45
你的问题有点模糊，你想通过测定酶活来筛选这个酰胺酶吗？如果是的话，那么可以从底物的变化和生成的氨基酸来检测酶活。前提是底物是有特定紫外吸光值，或将生成的氨基酸衍生化进行荧光检测。一点拙见，还望各位大侠指教。
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-14 09:22:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenlin0514

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-14 13:45:55
你可以做一个酶偶联筛选方案，即你的目的酶蛋白将内酰胺水解后生成特定的氨基酸后，再使用该氨基酸特异性催化酶进行反应，生成某种能够产生显色反应或是能与NADH等指示试剂产生反应，就可以进行筛选。
不过筛选方法最重要的稳定性和重复性，即对于同一个蛋白质使用该筛选方法需使CV小于等于10%，否则没有意义。
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-14 10:33:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gjs713

至尊木虫 (职业作家)
★
hraikeyan(金币+1): 谢谢参与
有一个较为常规的方法不知道楼主是否考虑过，采用茚三酮反应来进行筛选，大规模初筛可以通过纸层析或在96孔板上进行。。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-14 22:50:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭