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hraikeyan

金虫 (小有名气)

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[交流] 酰胺酶的筛选方法

各位大侠，最近我要构建一个酰胺酶的筛选方法。基因组文库都比较好建立，就是没有一个高效有效的筛选方法，不知有没有谁做过这方面的研究，能否指点一二。
ps：底物为内酰胺，被酶水解后变为氨基酸

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1楼 2012-05-12 21:27:22

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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流 2012-09-13 14:18:05

引用回帖:

5楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-05-15 14:20:21
用茚三酮显色法我们考虑过，具体是在一个文献上看到的，将构建的基因文库转化涂平板，在用沾有底物的滤纸沾平板上的菌落，使其反应一段时间后再用该滤纸沾用茚三酮湿润的滤纸，但结果是所有的印迹都显色。分析原因 ...

不好意思，可能之前因为帖子太多的缘故漏掉了你这个回复。
最近在看文献的过程中看到这么一篇Appl Microbiol Biotechnol 的文章
来自于上海华东理工的许建和团队
He Y-C, Ma C-L, Xu J-H, Zhou L (2011) A high-throughput screening strategy for nitrile-hydrolyzing enzymes based on ferric hydroxamate spectrophotometry. Appl Microbiol Biotechnol 89: 817-823.
介绍了一种高通量筛选的较为灵敏可以排除较多干扰的方法。。你稍微看看是否有参考价值？
另外，建议你可以多查查羧酸特异的颜色反应，这方面文献貌似更多一些，可行性估计也更高。做的人多。