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Minnie-zhang

新虫 (初入文坛)

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[求助] 双酶切粘性末端连接不上

本人正在超表达载体构建，需要用Pst1和Sal1双酶切质粒2300载体和目的基因，产生相同的粘性末端后连接，但就是连接不上，就高手指教！

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1楼2012-05-04 15:52:13

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honinglee

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-05 13:35:48

两个建议：1切后回收的片段用65度的去离子水溶最好不要用试剂盒里自己的EB洗脱，它里有盐，影响连接效率的。
2：不知道2300载体上两个位点隔多远？太近的话容易只单酶切。可以先单酶切后面的那个点，再单切前面的那个点，各一个小时足以；酶切后的大载体用去磷酸酶处理一下，防止自连。同时NEB的这两个酶都有HF的，防止星号活性产生。