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Minnie-zhang

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[求助] 双酶切粘性末端连接不上

本人正在超表达载体构建，需要用Pst1和Sal1双酶切质粒2300载体和目的基因，产生相同的粘性末端后连接，但就是连接不上，就高手指教！

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1楼2012-05-04 15:52:13

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Minnie-zhang

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-05-04 20:45:13:
你载体有没有蓝白筛选？
还有就是你载体有没有突变，或者是目的片段有没有突变，如果有的话导致两端都是同一种粘性末端的话肯定连不上，我以前遇到过这种问题。
载体浓度低无所谓，主要是片段尽可能多一些。
你 ...

我的目的基因是自己克隆的，连接到pMD19-T载体上，在转化到DH5a中保存菌液，要用的时候直接提取，再酶切。连接载体我用的是pucc2300载体，前面几次用双酶切，连接不上，上一次先用Sal1酶切再用Pst1单酶切，也没有连接上。我的载体浓度很低，这有没有很大的关系。还有，是不是先用Pst1酶切再用Sal1酶切会不会好些。