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可帅儿

银虫 (正式写手)

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[交流] 扩增曲线不平滑是怎么回事？

我又来了。。。
今天又做了一批荧光PCR，最后的结果是大致的曲线走向都对的，就是有个问题曲线不够平滑。图在下面。以前做了几次也有这个问题呢~请问这会是什么原因？
P.S.我用的是ABI7500做的，想同时做出扩增曲线和溶解曲线，请问有木有熟悉仪器的大虾，应该怎么setup才行呢？貌似实验type只能是一种。。。

配工作液还不太熟练，我怕配错；于是想一管一管加，这样至少不会有差错。

这是4个重复的反应，用的是50ul体系

这也是4个重复的，但是100ul体系，貌似效果比50 的好

[ Last edited by 可帅儿 on 2012-4-19 at 13:42 ]

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1楼2012-04-17 15:30:17

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chlorella409

木虫 (正式写手)

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★ ★ ★ ★ ★
可帅儿(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+4, Good！ 2012-04-19 17:27:17

首先我认为扩增曲线不光滑可能时因为还在基线期，其次，你要加溶解曲线的话可以在experiment menu的experiment properties里面选择检测试剂SYBRgreen下面就可以看到include melt curve在前面小框里打钩，第三，工作液可以先mix再分到每个孔里，cDNA最后加

[ Last edited by chlorella409 on 2012-4-19 at 15:55 ]