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xiazhiwuxie银虫 (小有名气)
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[求助]
大片段连接问题
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实验室得到一个片段为2300bp左右的DNA序列，但是连接了半个月都没有连上，连接体系是：19T 0.5ul 目的条带 5ul solution I 5ul 过夜4度，16度连接3h 也做过16度连接两夜 做过4度 期间确定目的条带回收正确，连接体系也用了最新的，感受态是买的，在这个条带的靠近3‘端约200bp是已知的，根据这个片段设计引物，扩增约为140bp。 得到的结果：1.不长菌 2.长菌，但是扩增无条带 3.长菌，扩增出140bp,但是测序后，结果告知插入片段只有200bp,且这200bp片段就是已知部分，抽了质粒后得知条带大约就是比2000bp的大点。 我快疯了，折腾了半个月，序列还没得到，求高人指导！ |
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