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木虫 (正式写手)

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[交流] 求教做RT-PCR的时候，每次p的时候都要做actin吗？还有荧和buffer的问题

2 我们仪器是bio-rad IQ5的机器，然后用的时候用的是自己配的预混液，TAQ酶的buffer 绿色的我用sybr的荧光可以P出来，但是无色的buffer就不行，如果换成FAM的荧光，无色buffer就可以P出来。知道是个什么原因。我们用的TAQ酶是promega的M3005

2 我们仪器是bio-rad IQ5的机器，然后用的时候用的是自己配的预混液，TAQ酶的buffer用的时候如果是绿色的buffer我用sybr的荧光可以P出来，但是无色的buffer就不行，如果换成FAM的荧光，无色buffer就可以P出来不知道。知道是个什么原因。我们用的TAQ酶是promega的M3005
5X 绿色反应缓冲液（Part#M791A,M791B）：专利配方，pH 值为 8.5。含有蓝色和黄色两种染料，在 1%浓度的琼脂
糖凝胶中，蓝色染料的迁移率与 3-5kb 大小的 DNA 片段相同，黄色染料的迁移率比引物（<50bp）快些。绿色的 GoTaq®
反应缓冲液还能增加样品的密度，可以使样品很好地沉入凝胶孔中，不用再加上样染料就能直接将样品加入凝胶孔
进行电泳。这个缓冲液含有 7.5mM 镁离子。融化后，在使用前要充分涡旋振荡混匀。
5X 无色反应缓冲液（Part#M792A,M792B）：专利配方，pH 值为 8.5。含有 7.5mM 的镁离子。融化后，在使用前充分震荡混匀。
中英文说明书如下
http://www.promega.com.cn/techserv/ctbs/M300GoTaq.pdf
http://www.promega.com/~/media/F ... lymerase%20M300.pdf
想问下，这两个荧光有什么区别，为什么buffer不一样，居然选择的荧光都不一样了，我记得老师告诉过我两种buffer就是加没加燃料的问题，绿色的buffer可以直接用来跑电泳白色的buffer跑电泳得再加loading buffer

[ Last edited by sntyc on 2012-4-11 at 15:14 ]

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1楼 2012-04-11 15:12:47

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