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[交流] 求教做RT-PCR的时候,每次p的时候都要做actin吗?还有荧和buffer的问题

2 我们仪器是bio-rad IQ5的机器,然后用的时候用的是自己配的预混液,TAQ酶的buffer 绿色的我用sybr的荧光可以P出来,但是无色的buffer就不行,如果换成FAM的荧光,无色buffer就可以P出来。知道是个什么原因。我们用的TAQ酶是promega的M3005


2 我们仪器是bio-rad IQ5的机器,然后用的时候用的是自己配的预混液,TAQ酶的buffer用的时候如果是 绿色的buffer我用sybr的荧光可以P出来,但是无色的buffer就不行,如果换成FAM的荧光,无色buffer就可以P出来不知道。知道是个什么原因。我们用的TAQ酶是promega的M3005
5X  绿色反应缓冲液(Part#M791A,M791B):专利配方,pH 值为 8.5。含有蓝色和黄色两种染料,在 1%浓度的琼脂
糖凝胶中,蓝色染料的迁移率与 3-5kb 大小的  DNA 片段相同,黄色染料的迁移率比引物(<50bp)快些。绿色的 GoTaq®
反应缓冲液还能增加样品的密度,可以使样品很好地沉入凝胶孔中,不用再加上样染料就能直接将样品加入凝胶孔
进行电泳。这个缓冲液含有 7.5mM 镁离子。融化后,在使用前要充分涡旋振荡混匀。
5X 无色反应缓冲液(Part#M792A,M792B):专利配方,pH 值为 8.5。含有 7.5mM 的镁离子。融化后,在使用前充分震荡混匀。
中英文说明书如下
http://www.promega.com.cn/techserv/ctbs/M300GoTaq.pdf
http://www.promega.com/~/media/F ... lymerase%20M300.pdf
想问下,这两个荧光有什么区别,为什么buffer不一样,居然选择的荧光都不一样了,我记得老师告诉过我两种buffer就是加没加燃料的问题,绿色的buffer可以直接用来跑电泳白色的buffer跑电泳得再加loading buffer

[ Last edited by sntyc on 2012-4-11 at 15:14 ]
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