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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 微卫星标记开发过程送测序的阳性克隆如何
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liulianwei

铁虫 (初入文坛)

[求助] 微卫星标记开发过程送测序的阳性克隆如何

大家好:
我现在做微卫星标记的开发,二次PCR后连接转化，挑取阳性克隆送测序，阳性克隆如何选择，有什么要求吗，谢谢！（附件是照片，2条带以上是阳性克隆）
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宥
1楼 2012-04-08 21:47:48
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a850924t

新虫 (小有名气)
请教下您这个为什么会有那么多条带？是用什么方法啊？胶的浓度是多少？谢谢了
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3楼2012-04-12 00:56:07
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励，很热心哦 2012-04-10 09:28:49
微卫星标记关注的大多还是其motif的样式，阳性克隆当然是越多越好，当然，挑取一些后了解其motif样式，再设计荧光引物，进行PCR，之后以Genescan来判断其长度和等位基因间的差异，并根据具体问题进行分析。祝好
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将相本无种★男儿当自强
2楼2012-04-10 00:22:04
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助哦 2012-04-12 13:43:15
条带多有几个原因
1.引物优化没有彻底，还存在很多的非特异扩增
2位点的多态性较高
一般使用1.5%的胶就可以
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将相本无种★男儿当自强
4楼2012-04-12 09:47:09
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lfangd1

新虫 (小有名气)
额是新手，想请教一下楼主，您做的二次PCR，是巢氏PCR，还是普通PCR？第一次P过后有跑胶吗？有的话是琼脂糖胶还是PAGE？如何判断是阳性克隆啊？是将菌液做双酶切吗？
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5楼2012-04-14 10:23:36
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