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yitiandeng木虫 (著名写手)
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求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆
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无连接酶亚克隆法 ，请亲们看好说明啊，别解释原理什么的[ Last edited by yitiandeng on 2012-4-8 at 15:52 ] |
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yitiandeng: 金币+30, 18 2012-04-08 20:19:37
| 提供三篇相关文献，希望对楼主有帮助。 |
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- 附件 3 : 2009 Circular Polymerase Extension Cloning of Complex Gene.pdf
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| 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR产物的效率通过较高，。在采用大量T4DNA连接酶并配以5-10u T4 RNA连接酶时，可显著提高其连接效率。对于较短PCR产物，用PUS19的HincⅡ位点进行克隆，以X－gal和IPTG筛选，常可得到足量重组子。另一种提高克隆效率的途径是先用Klenow大片段或T4DNA聚合酶消去3'末端突出碱基将PCR产物变成平端DNA，然后再用平端连接法克隆PCR产物。 |
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