应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆
52/1返回列表
查看: 2545  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yitiandeng

木虫 (著名写手)

[求助] 求助具体的（具体的）无连接酶亚克隆法全步骤，从PCR到克隆

无连接酶亚克隆法，请亲们看好说明啊，别解释原理什么的

[ Last edited by yitiandeng on 2012-4-8 at 15:52 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-04-08 15:50:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

忧郁的骑士

银虫 (初入文坛)
英语叫restriction free clone，RF clone，PCR产物两端有酶切载体的同源系列，15bp左右，PCR产物和酶切载体同时转化感受态大肠杆菌，大肠杆菌进行同源重组修复，形成环状。我们实验室用这种方法克隆了一万多个质粒，建库。
赞一下(2人) 回复此楼
12楼2012-10-13 18:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
.........................
不明白你的意图是什么，具体应用方向就有具体的方法，你说清楚了才好解释啊
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-04-08 15:56:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流！欢迎发表更多的见解！ 2012-04-08 17:13:26
你是不是说的是Invitrogen公司的Gateway技术？
1.高保真酶利用前引物含有CACC的引物组合克隆目的片段，纯化回收
2.Invitrogen公司pENTR载体试剂盒
pENTR                 1UL
Salt solution         1ul
PCR 产物        3ul
25度反应半小时后，转化大肠杆菌。
赞一下 回复此楼
hehe
3楼2012-04-08 17:10:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-08 17:10:22:
你是不是说的是Invitrogen公司的Gateway技术？
1.高保真酶利用前引物含有CACC的引物组合克隆目的片段，纯化回收
2.Invitrogen公司pENTR载体试剂盒
pENTR                 1UL
Salt solution         1ul
PCR ...

楼主问的是亚克隆技术哦，不是我挑刺，严格的说，入门克隆并不算亚克隆技术，而是克隆技术，之后的LR反应转入不同的载体才算是亚克隆技术，况且如果你以下的反应体系是搬自说明书的话，也是错的，说明书推荐6uL体系，你总共加起来只有5uL，反应半个小时，是会极大降低重组效率的，说明书一般推荐5min左右，随片段长度而改变，我们就是用3Kb的去连接也只用15min左右，所以朋友，要严谨
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-08 18:16:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 大佬帮着分析今年的评审意见？该课题连续申请了三年了，明年要不要换个方向。 100+3 cai-11138 2026-08-31 10/500 2026-09-06 19:40 by babero
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 19:21 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:21 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 18:01 by eObJPa4gWmp6
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 17:49 by eObJPa4gWmp6
[文学芳草园] 两块石头 +7 阿美_Lml888 2026-09-03 9/450 2026-09-06 17:48 by myrtle
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 9/450 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 7/350 2026-09-06 11:20 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 11:09 by eObJPa4gWmp6
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗？ +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-05 13:11 by haizai99
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭