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yitiandeng

木虫 (著名写手)

[求助] 求助具体的(具体的)无连接酶亚克隆法全步骤,从PCR到克隆

无连接酶亚克隆法,请亲们看好说明啊,别解释原理什么的

[ Last edited by yitiandeng on 2012-4-8 at 15:52 ]
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流!欢迎发表更多的见解! 2012-04-08 17:13:26
你是不是说的是Invitrogen公司的Gateway技术?
1.高保真酶利用前引物含有CACC的引物组合克隆目的片段,纯化回收
2.Invitrogen公司pENTR载体试剂盒
pENTR                 1UL
Salt solution         1ul
PCR 产物        3ul
25度反应半小时后,转化大肠杆菌。
hehe
3楼2012-04-08 17:10:22
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查看全部 14 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

.........................
不明白你的意图是什么,具体应用方向就有具体的方法,你说清楚了才好解释啊
Let God do with it as He wills
2楼2012-04-08 15:56:30
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-08 17:10:22:
你是不是说的是Invitrogen公司的Gateway技术?
1.高保真酶利用前引物含有CACC的引物组合克隆目的片段,纯化回收
2.Invitrogen公司pENTR载体试剂盒
pENTR                 1UL
Salt solution         1ul
PCR ...

楼主问的是亚克隆技术哦,不是我挑刺,严格的说,入门克隆并不算亚克隆技术,而是克隆技术,之后的LR反应转入不同的载体才算是亚克隆技术,况且如果你以下的反应体系是搬自说明书的话,也是错的,说明书推荐6uL体系,你总共加起来只有5uL,反应半个小时,是会极大降低重组效率的,说明书一般推荐5min左右,随片段长度而改变,我们就是用3Kb的去连接也只用15min左右,所以朋友,要严谨
Let God do with it as He wills
4楼2012-04-08 18:16:12
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yitiandeng: 金币+30, 18 2012-04-08 20:19:37
提供三篇相关文献,希望对楼主有帮助。

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5楼2012-04-08 19:52:20
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