| 查看: 3020 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
同时表达两种蛋白表达问题
|
|||
| 各位虫友，本人最近在做蛋白表达的实验，是将两个目的蛋白基因通过RBS相连接的方式克隆到pET30a表达载体上，用的是较强大的T7启动子，可是跑SDS-PAGE显示只表达了一种蛋白，其中RBS后面的蛋白没有表达，测序也都是正确！不知问题出在哪了？各位有做这种同时表达两种蛋白的吗？你们是通过什么方式同时表达两种蛋白？谢谢…… |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 1号文摘 |
» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有289人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关蛋白表达的问题
已经有25人回复
- 目的蛋白表达的问题
已经有20人回复
- 关于蛋白表达的问题
已经有3人回复
- 膜蛋白表达问题
已经有15人回复
- 问一下蛋白表达中出现的问题~
已经有7人回复
- 关于蛋白重组表达的问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】酵母表达可溶性蛋白问题
已经有12人回复
- 【求助/交流】组氨酸标记的蛋白表达活性问题
已经有17人回复
- 【求助/交流】蛋白酶表达问题，求蛋白表达系统
已经有4人回复
- 【求助/交流】关于绿色荧光蛋白表达问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】急！急！急！ his标签表达的蛋白出问题了，求指导！！！
已经有7人回复
- 【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
已经有9人回复
|
我简单的介绍一下采用的两种方法同时表达两种蛋白，用的是pET30a表达载体。方法一：T7启动子+蛋白A的起始密码子，蛋白A的序列，蛋白的终止密码子+RBS+蛋白B的起始密码子，蛋白B的序列，蛋白B的终止密码子。其中RBS和蛋白B的起始密码子直接相连没有其余序列。 这个方法只表达了RBS序列前的蛋白A，蛋白B没有表达。 方法二：T7启动子+蛋白B的起始密码子，蛋白B的序列，蛋白A的序列，蛋白A的终止密码子。利用这种方法是表达了这种融合蛋白，但是测酶活发现活性很低。我表达蛋白最终是要测酶活的，酶活性太低是在说不过去。我想是不是这两种蛋白这样整合在一起，酶的空间结构发生了变化，如酶的活性中心发生改变。现在我就比较倾向于方法一，只是还搞不明白蛋白B没有表达。不知这样算说明白了吗？谢谢 |
3楼2012-04-07 15:40:05
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
2楼2012-04-07 13:41:41
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
4楼2012-04-07 16:13:08
40