24小时热门版块排行榜    

查看: 4327  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yangzhengnan

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光pcr标准曲线问题

今天做了一条标准曲线,很奇怪,目的基因模板按2倍稀释,但是ct值却相差很小,复孔之间的差别很大,但内参复孔间的差别很小,不知各位大侠可不可以给点建议呢?到底是哪里出了问题?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR,所以能够给你些建议:1 稀释,你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧,一般的用水稀释,DNA并不能很好的均匀分散在水里,尤其是多次梯度稀释,模版稀释10倍,Ct值大约相差3.3,稀释2倍,那么 ...

大神,我们现在要检测的东西就是在fg级啊,400fg往下那几个点,老是重复性不好,唉,悲剧,莫非低拷贝时没有好的解决办法吗?
做的好的时候线性倒是蛮好的
9楼2013-09-22 13:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 2倍确实太小 2012-04-05 18:43:54
有图有真相
复孔指的技术重复吗?如果是的,注意加样误差,甩出来一丁点都会影响Ct值,同样注意机子可能有加热不匀的情况
为何做2倍稀释呢,太小了吧,稀释10倍看看吧
个人经验,若有说错,高手指点哦
Let God do with it as He wills
2楼2012-04-05 17:38:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跟我遇到的问题一样,多做几次吧。有可能是基因丰度太低,所以你稀释的不均匀可能是主要原因。因为内参的丰度高,所以你操作的影响不大,但是目的基因就不一样了
3楼2012-04-05 18:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
理想情况下扩增效率为100%,产物按2的N次方递增,如果模板量相差8倍,Ct值也就相差3而已(2^3=8),所以你的2倍梯度,Ct值也就相差1左右。一般做标准曲线取10倍梯度比较常见哦。
4楼2012-04-05 18:45:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +3 vv迷 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:05 by f19980501
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +5 张vvvv 2026-03-15 7/350 2026-03-21 19:23 by ColorlessPI
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂 +3 Surekei 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:31 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕英一数二306 +7 z1z2z3879 2026-03-18 7/350 2026-03-20 23:48 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 5/250 2026-03-20 22:11 by 云游重阳
[考研] 289求调剂 +6 怀瑾握瑜l 2026-03-20 6/300 2026-03-20 20:30 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-20 5/250 2026-03-20 20:16 by JourneyLucky
[考研] 一志愿西安交通大学 学硕 354求调剂211或者双一流 +3 我想要读研究生 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:13 by JourneyLucky
[考研] 286求调剂 +6 lemonzzn 2026-03-16 10/500 2026-03-19 14:31 by lemonzzn
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考博] 26申博 +4 八6八68 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
信息提示
请填处理意见