24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4386  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yangzhengnan

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光pcr标准曲线问题

今天做了一条标准曲线,很奇怪,目的基因模板按2倍稀释,但是ct值却相差很小,复孔之间的差别很大,但内参复孔间的差别很小,不知各位大侠可不可以给点建议呢?到底是哪里出了问题?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by beautybanana at 2012-06-24 12:35:41
我做了一年多的荧光定量PCR,所以能够给你些建议:1 稀释,你大概是用灭菌的去离子水稀释的吧,一般的用水稀释,DNA并不能很好的均匀分散在水里,尤其是多次梯度稀释,模版稀释10倍,Ct值大约相差3.3,稀释2倍,那么 ...

大神,我们现在要检测的东西就是在fg级啊,400fg往下那几个点,老是重复性不好,唉,悲剧,莫非低拷贝时没有好的解决办法吗?
做的好的时候线性倒是蛮好的
9楼2013-09-22 13:20:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 2倍确实太小 2012-04-05 18:43:54
有图有真相
复孔指的技术重复吗?如果是的,注意加样误差,甩出来一丁点都会影响Ct值,同样注意机子可能有加热不匀的情况
为何做2倍稀释呢,太小了吧,稀释10倍看看吧
个人经验,若有说错,高手指点哦
Let God do with it as He wills
2楼2012-04-05 17:38:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跟我遇到的问题一样,多做几次吧。有可能是基因丰度太低,所以你稀释的不均匀可能是主要原因。因为内参的丰度高,所以你操作的影响不大,但是目的基因就不一样了
3楼2012-04-05 18:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
理想情况下扩增效率为100%,产物按2的N次方递增,如果模板量相差8倍,Ct值也就相差3而已(2^3=8),所以你的2倍梯度,Ct值也就相差1左右。一般做标准曲线取10倍梯度比较常见哦。
4楼2012-04-05 18:45:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297,工科调剂?河南农业大学本科 +14 河南农业大学-能 2026-04-14 14/700 2026-04-16 14:41 by dingyanbo1
[考研] 085404 298分求调剂 +12 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 13/650 2026-04-16 11:00 by 阿文超
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +22 hualkop 2026-04-12 24/1200 2026-04-16 10:54 by Espannnnnol
[考研] 290调剂生物0860 +38 哇哈哈,。 2026-04-11 44/2200 2026-04-16 09:52 by cuisz
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 求调剂推荐 +8 小聂爱学习 2026-04-14 8/400 2026-04-16 07:22 by 学员JpLReM
[考研] 调剂求收留 +34 果然有我 2026-04-10 35/1750 2026-04-15 13:05 by 西北望—风沙
[考研] 考研求调剂 +12 子木呐 2026-04-12 13/650 2026-04-14 01:19 by 王珺璞
[考研] 一志愿华南理工大学331分材料求调剂 +10 天下ww 2026-04-09 11/550 2026-04-13 23:25 by pies112
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 22408调剂求助 +7 毂12 2026-04-09 9/450 2026-04-11 09:23 by 哦哦123
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
请填处理意见