24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4376  |  回复: 21
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yangzhengnan

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光pcr标准曲线问题

今天做了一条标准曲线,很奇怪,目的基因模板按2倍稀释,但是ct值却相差很小,复孔之间的差别很大,但内参复孔间的差别很小,不知各位大侠可不可以给点建议呢?到底是哪里出了问题?
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

实验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
理想情况下扩增效率为100%,产物按2的N次方递增,如果模板量相差8倍,Ct值也就相差3而已(2^3=8),所以你的2倍梯度,Ct值也就相差1左右。一般做标准曲线取10倍梯度比较常见哦。
4楼2012-04-05 18:45:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 22 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 2倍确实太小 2012-04-05 18:43:54
有图有真相
复孔指的技术重复吗?如果是的,注意加样误差,甩出来一丁点都会影响Ct值,同样注意机子可能有加热不匀的情况
为何做2倍稀释呢,太小了吧,稀释10倍看看吧
个人经验,若有说错,高手指点哦
Let God do with it as He wills
2楼2012-04-05 17:38:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
跟我遇到的问题一样,多做几次吧。有可能是基因丰度太低,所以你稀释的不均匀可能是主要原因。因为内参的丰度高,所以你操作的影响不大,但是目的基因就不一样了
3楼2012-04-05 18:35:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangzhengnan

新虫 (初入文坛)

是不是稀释倍数少,复孔之间差别又大,这样就影响扩增效率呢,今天又做了一次,还是超过120%,请问有什么办法呢?可不可以升高退火温度?谢谢大家的帮忙!请教下孙启亮,你的结果做出来了么,问题是怎么解决的呢?
5楼2012-04-06 13:41:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 生物学调剂 +6 小冉要努力 2026-04-10 7/350 2026-04-11 08:26 by LPT1978
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +4 弱水听文 2026-04-09 4/200 2026-04-10 22:01 by doctff
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 材料工程日语考生求调剂 +5 0856?调剂 2026-04-10 5/250 2026-04-10 20:45 by yukihao
[考研] 296求调剂 +6 汪!?! 2026-04-08 6/300 2026-04-10 11:02 by mattzhming
[考研] 一志愿2110,化学学硕310分,本科重点双非求调剂 +18 努力奋斗112 2026-04-08 18/900 2026-04-09 23:28 by wolf97
[考研] 085404 293求调剂 +7 勇远库爱314 2026-04-08 7/350 2026-04-09 16:02 by 猪会飞
[考研] 349学科化学045106求调剂,化学类都可以 +8 保好懂懂 2026-04-08 8/400 2026-04-09 14:03 by xulei3024
[考研] 280求调剂 +5 兮兮夜夜 2026-04-09 8/400 2026-04-09 11:15 by 兮兮夜夜
[考研] 材料调剂 +14 一样YWY 2026-04-06 14/700 2026-04-08 23:00 by 猪会飞
[考研] 机械工程264学硕求调剂 +3 qiushangxian 2026-04-06 3/150 2026-04-08 01:53 by Linzejun
[考研] 计算机408|在校多次国家级竞赛获奖|申请调剂 +4 东山大白鹅 2026-04-05 4/200 2026-04-08 00:18 by chongya
[考研] 材料工程专业日语生求调剂 +9 111623 2026-04-07 9/450 2026-04-07 23:31 by 一只好果子?
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 085405软件工程301分求调剂,专硕可跨专业,四六级已过 +3 静静想想 2026-04-05 3/150 2026-04-06 15:23 by nepu_uu
[考研] 专硕304找调剂,一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 求调剂到0856材料工程 +3 程9915 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:15 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂 +11 小sun要好运 2026-04-04 11/550 2026-04-05 08:02 by qlm5820
[考研] 材料383求调剂 +5 郭阳阳阳成 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:06 by dongzh2009
信息提示
请填处理意见