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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pAN7-1质粒分析
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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1楼 2012-04-02 20:59:11
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我们这边是用来转化黑曲霉的，PAN7-1是主要包含来源于构巢曲霉的强GPD启动子、翻译起始区域、信号肽的编码区域、来源于构巢曲霉的TtrpC转录终止信号和多聚腺苷酸作用的信号序列。并且在转录起始区域含有增强基因表达信号的KOZAK结构
我们这边是用pUC19或者类此的质粒做骨架构建好启动子，目的片段和终止子然后与PAN7-1共转化到宿舍的原生质体中去在hph抗性平板上筛选转化子
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8楼2013-04-14 19:58:39
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jinhx87

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
madengyu: 金币+2 2012-04-03 20:54:09
madengyu: 金币+1 2012-05-04 08:33:15
是不是在大肠杆菌里要表达真核生物基因呢？
应该利用单酶切位点。
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2楼2012-04-03 16:12:16
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madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2012-04-03 19:43:02
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爱莫若月

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
madengyu: 金币+1 2012-05-04 08:35:46
楼主您好，我做实验需要PAN7-1，不知道能不能拿其他的跟您交换一下啊？
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4楼2012-05-03 11:48:16
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

GenBank：Z32698.1 ， GI:475166。
质粒花了多少钱买？交换吗?
如果你的目的基因前后没带有启动子和终止子的话，可以考虑用BamHI位点连接。从我分析的结果看（注意不是看文献别人做的结果看），salI也可以用。如果你的片段BamHI，salI两种酶都有的话，把载体酶切后补平进行平端连接吧。
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为什么
5楼2012-05-27 00:08:36
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547star

木虫 (著名写手)
补充,平端连接会有2个方向,如果目的片段没带有启动子和终止子,需要进行方向筛选.
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为什么
6楼2012-05-27 00:20:16
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skylar12

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主你好，你的问题解决了吗？我现在也是碰到这样的问题了，麻烦指教
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7楼2013-04-14 12:34:45
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czfscf

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ptzhyding06 at 2013-04-14 19:58:39
我们这边是用来转化黑曲霉的，PAN7-1是主要包含来源于构巢曲霉的强GPD启动子、翻译起始区域、信号肽的编码区域、来源于构巢曲霉的TtrpC转录终止信号和多聚腺苷酸作用的信号序列。并且在转录起始区域含有增强基因表达 ...

你好，请问有含潮霉素b抗性基因的双元载体吗，小弟现在做农杆菌介导真菌转化，想要个双元质粒，可否赠送或者交换，购买也成！万分感激
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Ecological Genomics；the scientific walking hormone
9楼2013-05-03 16:34:21
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ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by czfscf at 2013-05-03 16:34:21
你好，请问有含潮霉素b抗性基因的双元载体吗，小弟现在做农杆菌介导真菌转化，想要个双元质粒，可否赠送或者交换，购买也成！万分感激...

可以问一下楼主 他的PAN质粒上有潮霉素的抗性基因
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10楼2013-05-06 13:22:58
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