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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
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fengycao

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2012-03-28 20:47:44
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, Good! 2012-04-03 15:11:16
我觉得是引物特异性的问题，你用这对引物已经完成了cDNA里面扩增目的基因，并且构建了几个表达载体，每次PCR产物电泳都是单一的目标条带。只能说明对于cDNA模板来说特异性很强。但是基因组要比cDNA多出很多序列，这就不能保证你这一对引物扩增时的特异性了。
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6楼2012-04-03 10:21:02
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
引物中间多出了150个碱基的片段？灵异事件，占楼围观....
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2楼2012-03-28 22:36:50
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-03-29 10:21:09
嗯.........
我觉得并不是什么灵异事件哦，拿我某师妹最近遇到的情况：
她做克隆，CDS转入载体转化后挑了阳性菌送测，送测时多了个心眼，就送了电泳正确的两个阳性菌，最后测序结果出来，一个是正确的，另一个就是乱七八糟的东西，除了头尾引物扩增后的数百bp是正确的，中间有一堆都不知道是啥玩意.....亏的她还有聊的去BLAST了一下，发现跟人类啥啥啥基因还有挺高的匹配的（她自己语），所以最后我们假设了一番后取笑她：PCR的时候最好不要乱打喷嚏...........
所以，多送几个阳性去测，如果都是这番状况那就另当别论了，祝实验顺利
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Let God do with it as He wills
3楼2012-03-29 00:48:49
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fengycao

禁虫 (初入文坛)
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4楼2012-04-02 22:18:32
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