| 查看: 3054 | 回复: 12 | ||||
[交流]
SDS-PAGE样品浓缩的方法
|
||||
SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂（例如：TCA）？具体步骤？ [ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质实验技术 |
» 猜你喜欢
08工学调剂
已经有5人回复
-
281求调剂（0805）
已经有25人回复
-
085600材料与化工
已经有6人回复
-
265求调剂
已经有8人回复
-
0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章
已经有21人回复
-
295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕
已经有4人回复
-
0856调剂，是学校就去
已经有9人回复
-
298-一志愿中国农业大学-求调剂
已经有9人回复
-
求调剂
已经有4人回复
-
学校已经提交到NSFC，还能修改吗？
已经有7人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE蛋白电泳
已经有24人回复
- SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题
已经有27人回复
- 【转】我在SDS-PAGE中所犯的错误，欢迎补充！
已经有33人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳
已经有23人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳图 求高人帮忙分析下问题所在 谢谢啦！
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？
已经有20人回复
- 【求助/交流】大神们来看一看 这个胶是怎么回事？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
已经有38人回复
- 【求助/交流】用于SDS-PAGE的菌液样品浓缩问题
已经有4人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
中国科学院杭州医学研究-常皓研究员课题组博士后招聘
+1/283
-
广东工业大学-木质纤维素高值化利用团队招博士研究生
+1/91
-
浙江大学侯阳教授团队诚聘博士后---高性能固态电解质与固态电池器件设计
+1/90
-
华南理工-广中医联合招收生物医学与材料交叉学科博士生
+1/84
-
春天就该逛吃逛吃
+1/83
-
散金币，求基金中标！！
+1/64
-
加拿大阿尔伯塔大学招收电磁、无线通信、机器学习方向全奖硕士/博士/博士后/访问学者
+1/53
-
吲哚美辛原料药合成交流
+1/36
-
上海交通大学沈道智副教授招收2026年联培博士/硕士研究生（微纳器件与制造方向）
+1/33
-
2026年工科硕士调剂-上海大学全国重点实验室团队-材料数据挖掘方向-研究生3-5人
+1/30
-
招聘科研助理——储能方向（储能、流体传热、CFD模拟）
+1/17
-
26年博士自荐
+1/16
-
湖南大学微生物结构与功能实验室2026年计划招收博士研究生
+1/16
-
中国农科院兰州牧药所兽药创新与耐药性科研团队聘科研助理，急急急！
+1/15
-
深圳信息职业大学招聘联合培养硕博研究生（急）
+1/10
-
新加坡国立大学药学系化学生物学课题组招PhD
+1/7
-
南京林业大学木质纤维功能材料国际联合创新中心招收2026级博士生（申请-考核制）
+2/2
-
西安交通大学生命学院智能化诊疗装备研究中心2026年博士生招生
+1/1
-
国家杰青低维材料与器件力学团队2026年招收博士研究生
+1/1
-
CTLA-4抗体如何重塑肿瘤免疫治疗格局？
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
|
这是我一直用的TCA方法 Normal TCA To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration 1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20C and then 15min 4C; or longer time at 4C without the –20C step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low. 1) (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 2) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). 3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow color as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
6楼2012-03-26 21:07:16
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45
|
这个是最常用的TCA沉淀方法，一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下来，也就是说大概还有5μg/ml左右蛋白不能沉淀来，这是理论的，实际收率与样品和操作相关，如果你样品比这浓度还低的话可以试下TCA-DOC沉淀，能沉淀1μg/ml以下的蛋白，然后银染。 TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent). 2) Vortex and let sit for 30min at 4C. 3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4C (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 4) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20C). Vortex and re-pellet samples 5min at full speed between washes]. 5) Dry samples under vacuum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
9楼2012-03-26 22:04:27
2楼2012-03-25 23:17:06
3楼2012-03-25 23:43:09
4楼2012-03-26 09:13:32
5楼2012-03-26 09:16:16
7楼2012-03-26 21:42:52
8楼2012-03-26 21:46:56
送鲜花一朵 |
很有帮助！！能不能发一下这种方法的出处啊？（文献或资料）chunqizzm@126.com 还有就是，TCA-DOC方法中DOC（脱氧胆酸钠）起什么作用知道吗？？第4步中OPTION的要用到丙酮是不是必须要这一步啊？ 本来是想再送JB的可是一个人只能送10个！ |
10楼2012-03-27 07:32:48
11楼2012-03-27 11:36:06
12楼2012-03-27 16:14:18
13楼2013-03-29 15:10:30
