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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大神们来看一看 这个胶是怎么回事？？？？
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laoshu16

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大神们来看一看 这个胶是怎么回事？？？？

直接上图 大神们赶快帮我想想辙


最后一个泳道 是MBP融合蛋白纯化后PEG浓缩的样品 15%SDS-PAGE检测就是这个样子了 其它泳道一切正常

再补充说明一下 融合蛋白存在于Tris，NaCl，TX100。。。

[ Last edited by laoshu16 on 2011-2-25 at 10:22 ]
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1楼 2011-02-24 19:06:02
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glidingwater

银虫 (小有名气)
★
laoshu16(金币+1): 2011-02-24 19:17:16
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 14:02:39
弱弱地怀疑配胶时椭圆处有透明杂质或存在气泡
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2楼2011-02-24 19:14:30
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laoshu16

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by glidingwater at 2011-02-24 19:14:30:
弱弱地怀疑配胶时椭圆处有透明杂质或存在气泡

我也是这样猜的 但是跑胶前观察胶没有异样啊
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3楼2011-02-24 19:17:55
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glidingwater

银虫 (小有名气)
★
翱宇(金币+1): 鼓励交流 2011-02-24 19:42:21
laoshu16(金币+1): 2011-02-25 08:49:56
引用回帖:
Originally posted by laoshu16 at 2011-02-24 19:17:55:
我也是这样猜的 但是跑胶前观察胶没有异样啊

可以怀疑的是板没有清洗干净，存在是透明的干胶，从而影响结果。
建议再次跑电泳，可以多泳道对照。
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4楼2011-02-24 19:24:28
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laoshu16

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by glidingwater at 2011-02-24 19:24:28:
可以怀疑的是板没有清洗干净，存在是透明的干胶，从而影响结果。
建议再次跑电泳，可以多泳道对照。

重新跑了一次 还是一样 应该不是胶的问题 应该是样品
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5楼2011-02-25 08:50:30
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woshishao

金虫 (初入文坛)
★ ★
laoshu16(金币+1): 2011-02-25 11:03:03
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-02-25 14:02:58
虽然没有碰到过这样的问题，因为实验室没有用PEG浓缩过蛋白。但是我想问个问题：除了这个孔道的样品是用PEG处理过的外，其余的样品用PEG处理过么？如果就只有这个样品是PEG处理过的，我在想会不会是电泳前99度样品处理时，样品中的PEG在高温下发生复杂的反应，甚至交联形成了团块物质，电泳后就出现图上的透明团块。。。。
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6楼2011-02-25 10:45:48
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laoshu16

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by woshishao at 2011-02-25 10:45:48:
虽然没有碰到过这样的问题，因为实验室没有用PEG浓缩过蛋白。但是我想问个问题：除了这个孔道的样品是用PEG处理过的外，其余的样品用PEG处理过么？如果就只有这个样品是PEG处理过的，我在想会不会是电泳前99度样品 ...

其它样品没有PEG浓缩，但是我的样品是装在透析袋里，PEG在透析袋外，分子量是20000，透析袋是8000，PEG是进不去的呀。
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7楼2011-02-25 11:04:46
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gaowei706

铁杆木虫 (职业作家)
laoshu16(金币+1): 2011-02-25 13:09:41
把样品点到中间泳道看看，可能是太靠边了
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8楼2011-02-25 11:18:47
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woshishao

金虫 (初入文坛)
laoshu16(金币+1): 2011-02-25 13:11:23
楼主要是不嫌麻烦的话，对该样品加入巯基乙醇后，不用99度处理，直接进行凝胶电泳看看，因为还没有遇到过这样的问题，仅限于尝试，希望对楼主有帮助。。。
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9楼2011-02-25 11:26:04
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toxicpeach

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-02-25 14:03:19
laoshu16(金币+2): 2011-02-25 14:06:44
不知道是PEG还是TX100形成了大分子团，影响了电泳，又是大团，又是拖尾的。去垢剂浓度太高会影响电泳
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10楼2011-02-25 14:00:38
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