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SDS-PAGE样品浓缩的方法
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SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂（例如：TCA）？具体步骤？ [ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ] |
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 蛋白质实验技术 |
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chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
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这是我一直用的TCA方法 Normal TCA To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration 1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20C and then 15min 4C; or longer time at 4C without the –20C step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low. 1) (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 2) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). 3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow color as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
6楼2012-03-26 21:07:16