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chunqizzm

银虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE样品浓缩的方法

SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂（例如：TCA）？具体步骤？

[ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ]
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1楼2012-03-25 22:56:22
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mingxie

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有浓缩器的话超滤吧，比较简便
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4楼2012-03-26 09:13:32
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chunqizzm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zlu520 at 2012-03-25 23:17:06:
柱层析 透析

会不会很费事啊？能浓缩50或100倍吗？
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3楼2012-03-25 23:43:09
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xingnian0925

金虫 (小有名气)
可以试试超滤管。
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5楼2012-03-26 09:16:16
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
这是我一直用的TCA方法
Normal TCA
To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration
1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20C and then 15min 4C; or longer time at 4C without the –20C step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.
1) (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!).
2) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).
3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow color as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.)
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6楼2012-03-26 21:07:16
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