应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE样品浓缩的方法
131/1返回列表
查看: 2817  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

chunqizzm

银虫 (小有名气)

[交流] SDS-PAGE样品浓缩的方法

SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂（例如：TCA）？具体步骤？

[ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质实验技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-25 22:56:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
这是我一直用的TCA方法
Normal TCA
To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration
1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20C and then 15min 4C; or longer time at 4C without the –20C step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low.
1) (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!).
2) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see).
3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow color as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.)
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2012-03-26 21:07:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45
引用回帖:
6楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-03-26 21:07:16:
这是我一直用的TCA方法
Normal TCA
To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration
1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentr ...

这个是最常用的TCA沉淀方法，一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下来，也就是说大概还有5μg/ml左右蛋白不能沉淀来，这是理论的，实际收率与样品和操作相关，如果你样品比这浓度还低的话可以试下TCA-DOC沉淀，能沉淀1μg/ml以下的蛋白，然后银染。

TCA-DOC
For precipitation of very low protein concentration
1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).
2) Vortex and let sit for 30min at 4C.
3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4C (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!).
4) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20C). Vortex and re-pellet samples 5min at full speed between washes].
5) Dry samples under vacuum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.)
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

chunqizzm
9楼2012-03-26 22:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zlu520

至尊木虫 (职业作家)
柱层析 透析
回复此楼
2楼2012-03-25 23:17:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zlu520 at 2012-03-25 23:17:06:
柱层析 透析

会不会很费事啊？能浓缩50或100倍吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-25 23:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mingxie

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有浓缩器的话超滤吧，比较简便
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-26 09:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingnian0925

金虫 (小有名气)
可以试试超滤管。
回复此楼
5楼2012-03-26 09:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mingxie at 2012-03-26 09:13:32:
有浓缩器的话超滤吧，比较简便

浓缩器？能不能给个相关介绍的链接啊！是不是GE卖的那种啊？
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-26 21:42:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by xingnian0925 at 2012-03-26 09:16:16:
可以试试超滤管。

谢谢！SDS-PAGE电泳样品本来就少的话，用超滤管可能就行不通了。
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-26 21:46:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
9楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-03-26 22:04:27:
这个是最常用的TCA沉淀方法，一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下来，也就是说大概还有5μg/ml左右蛋白不能沉淀来，这是理论的，实际收率与样品和操作相关，如果你样品比这浓度还低的话可以试下TCA-DOC沉淀，能沉 ...

很有帮助！！能不能发一下这种方法的出处啊？（文献或资料）chunqizzm@126.com  还有就是，TCA-DOC方法中DOC（脱氧胆酸钠）起什么作用知道吗？？第4步中OPTION的要用到丙酮是不是必须要这一步啊？
本来是想再送JB的可是一个人只能送10个！
赞一下 回复此楼
10楼2012-03-27 07:32:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wen1023tao

铜虫 (小有名气)
低温冷冻干燥
回复此楼
11楼2012-03-27 11:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

livein合肥

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by zlu520 at 2012-03-25 23:17:06:
柱层析 透析

借此宝地请教一个问题：想把纤维素酶进行纯化，应该怎么做呢？所分离的酶对葡聚糖凝胶有分解能力，能用琼脂糖凝胶代替吗？
赞一下 回复此楼
12楼2012-03-27 16:14:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shasha沙

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我采用TCA-DOC的方法浓缩了一下胞外上清液中的蛋白，可以看见明显的白色沉淀，但是加入loading buffer煮沸五分钟后，沉淀没有溶解，应该怎么办？
赞一下 回复此楼
13楼2013-03-29 15:10:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chunqizzm 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭