24小时热门版块排行榜    

查看: 3051  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)


[交流] SDS-PAGE样品浓缩的方法

SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂(例如:TCA)?具体步骤?

[ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质实验技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45
引用回帖:
6楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-03-26 21:07:16:
这是我一直用的TCA方法
Normal TCA
To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration
1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentr ...

这个是最常用的TCA沉淀方法,一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下来,也就是说大概还有5μg/ml左右蛋白不能沉淀来,这是理论的,实际收率与样品和操作相关,如果你样品比这浓度还低的话可以试下TCA-DOC沉淀,能沉淀1μg/ml以下的蛋白,然后银染。

TCA-DOC
For precipitation of very low protein concentration
1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).
2) Vortex and let sit for 30min at 4C.
3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4C (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!).
4) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20C). Vortex and re-pellet samples 5min at full speed between washes].
5) Dry samples under vacuum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.)

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

9楼2012-03-26 22:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

chunqizzm

银虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by zlu520 at 2012-03-25 23:17:06:
柱层析 透析

会不会很费事啊?能浓缩50或100倍吗?
3楼2012-03-25 23:43:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mingxie

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
有浓缩器的话超滤吧,比较简便
4楼2012-03-26 09:13:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingnian0925

金虫 (小有名气)


可以试试超滤管。
5楼2012-03-26 09:16:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +18 不知道叫什么! 2026-03-15 20/1000 2026-03-20 13:52 by danney002
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +14 陌の森林 2026-03-18 14/700 2026-03-19 22:38 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人!!! +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 6/300 2026-03-19 17:18 by fei626-918
[考研] 085601材料工程专硕求调剂 +10 慕寒mio 2026-03-16 10/500 2026-03-19 15:26 by 丁丁*
[考研] 0817调剂 +3 没有答案_ 2026-03-14 3/150 2026-03-19 09:51 by Xu de nuo
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 344求调剂 +6 knight344 2026-03-16 7/350 2026-03-18 20:13 by walc
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 311求调剂 +11 冬十三 2026-03-15 12/600 2026-03-18 14:36 by 星空星月
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 268求调剂 +6 简单点0 2026-03-17 6/300 2026-03-18 09:04 by 无际的草原
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +6 大火山小火山 2026-03-16 8/400 2026-03-17 15:05 by 无懈可击111
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗? 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
信息提示
请填处理意见