24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)

BioEPI: 1
应助: 5 (幼儿园)
金币: 1101.6
帖子: 123
在线: 78.7小时
虫号: 1264287

[交流] SDS-PAGE样品浓缩的方法

SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂（例如：TCA）？具体步骤？

[ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ]

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质实验技术

» 猜你喜欢

售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急已经有3人回复
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急已经有3人回复
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急已经有3人回复
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急已经有3人回复
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急已经有5人回复
售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急已经有7人回复
上海工程技术大学激光智能制造课题组 2027级博士研究生招生已经有6人回复
课题组招2027级博士上海工程技术大学激光智能制造方向已经有6人回复
师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？已经有4人回复
有机合成以后会不会被AI改变？做科研的虫友怎么看已经有8人回复

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

SDS-PAGE蛋白电泳已经有24人回复
SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题已经有27人回复
【转】我在SDS-PAGE中所犯的错误，欢迎补充！已经有33人回复
SDS-PAGE蛋白电泳已经有23人回复
原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？已经有7人回复
【求助/交流】SDS-PAGE电泳图求高人帮忙分析下问题所在谢谢啦！已经有19人回复
【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？已经有20人回复
【求助/交流】大神们来看一看这个胶是怎么回事？？？？已经有9人回复
【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题已经有38人回复
【求助/交流】用于SDS-PAGE的菌液样品浓缩问题已经有4人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴

1楼 2012-03-25 22:56:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

应助: 30 (小学生)
金币: 11805.1
帖子: 1103
在线: 151.6小时
虫号: 1043380

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45

引用回帖:

6楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-03-26 21:07:16:
这是我一直用的TCA方法
Normal TCA
To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration
1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentr ...

这个是最常用的TCA沉淀方法，一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下来，也就是说大概还有5μg/ml左右蛋白不能沉淀来，这是理论的，实际收率与样品和操作相关，如果你样品比这浓度还低的话可以试下TCA-DOC沉淀，能沉淀1μg/ml以下的蛋白，然后银染。

TCA-DOC
For precipitation of very low protein concentration
1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent).
2) Vortex and let sit for 30min at 4C.
3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4C (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!).
4) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20C). Vortex and re-pellet samples 5min at full speed between washes].
5) Dry samples under vacuum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.)