| 查看: 3439 | 回复: 12 | ||||
[交流]
SDS-PAGE样品浓缩的方法
|
||||
SDS-PAGE样品需要浓缩大家用的是什么试剂（例如：TCA）？具体步骤？ [ Last edited by chunqizzm on 2012-3-25 at 23:36 ] |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 蛋白质实验技术 |
» 猜你喜欢
今天系统多次维护，明天很可能放榜！
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有74人回复
-
岩土工程学报什么时候才能终审完呐
已经有4人回复
-
时间戳又变了8-15
已经有25人回复
-
2027广东省杰青
已经有6人回复
-
快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。
已经有3人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有9人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有26人回复
-
我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人
已经有16人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有12人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- SDS-PAGE蛋白电泳
已经有24人回复
- SDS-PAGE 蛋白胶跑胶问题
已经有27人回复
- 【转】我在SDS-PAGE中所犯的错误，欢迎补充！
已经有33人回复
- SDS-PAGE蛋白电泳
已经有23人回复
- 原核表达中SDS-PAGE上样量如何确定？
已经有7人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳图 求高人帮忙分析下问题所在 谢谢啦！
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白样品加热煮过和不煮，SDS-PAGE结果差异显著，这是为何？
已经有20人回复
- 【求助/交流】大神们来看一看 这个胶是怎么回事？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】SDS-PAGE电泳问题
已经有38人回复
- 【求助/交流】用于SDS-PAGE的菌液样品浓缩问题
已经有4人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
2026年财务管理、经济与信息技术国际会议 (FMEIT 2026)
+1/604
-
祝福！基金中中中！！！！
+1/396
-
[求助]请问水下焊接技术有啥进步？
+1/191
-
山东征女友，坐标济南
+1/164
-
北京信息科技大学机电工程学院硕士研究生招生线上宣讲会——8月16日
+1/81
-
东南大学杰青/海优团队招聘催化方向博士后
+1/81
-
中国科学院空天院精密干涉测量团队招聘光学/算法/机械方向博士后/特别研究助理
+1/80
-
中国科学院空天院精密干涉测量团队招聘光学/算法/机械方向博士后/特别研究助理
+1/80
-
中国科学院空天院精密干涉测量团队招聘光学/算法/机械方向博士后/特别研究助理/工程师
+1/78
-
广东医科大学博士后招聘-基础医学，生信等方向
+1/38
-
加拿大/英属哥伦比亚大学曹彦凯课题组招收博后 [机器人/控制方向]
+1/33
-
加拿大/英属哥伦比亚大学曹彦凯课题组招收全奖博士/博后 [机器人/控制方向]
+1/31
-
希望这篇论文能中
+2/12
-
西安交通大学杜宝吉课题组招收申请考核制博士生
+2/6
-
UTS 招收2027年入学博士生
+1/3
-
华南理工，博士后
+1/3
-
中国科学技术大学环境学院招聘招生
+1/2
-
海南大学化学院-科研助理招聘 （可读博，可与华中科技大学，天津大学联培）+博后招聘
+1/2
-
海南大学化学院—功能分子器件团队2027博士招生+博士后招聘
+1/2
-
中山大学国家级青年人才课题组招收推免硕士2名（2027年入学）
+2/2
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5, 有帮助！谢谢！！不知道你有计算过这种方法的样品回收率没有？ 2012-03-26 21:40:40
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-26 21:40:44
|
这是我一直用的TCA方法 Normal TCA To eliminate TCA soluble interferences and protein concentration 1) To a sample of protein solution add Trichloroacetic acid (TCA) 100% to get 13% final concentration. Mix and keep 5min –20C and then 15min 4C; or longer time at 4C without the –20C step for lower protein concentration. Suggestion: leave ON if the protein concentration is very low. 1) (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 2) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). 3) For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow color as a consequence of the acidification of the sample buffer ; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
6楼2012-03-26 21:07:16
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
chunqizzm: 金币+5 2012-03-27 07:21:19
chunqizzm: 回帖置顶 2012-03-27 07:21:45
|
这个是最常用的TCA沉淀方法，一般需要蛋白在5μg/ml以上才能沉下来，也就是说大概还有5μg/ml左右蛋白不能沉淀来，这是理论的，实际收率与样品和操作相关，如果你样品比这浓度还低的话可以试下TCA-DOC沉淀，能沉淀1μg/ml以下的蛋白，然后银染。 TCA-DOC For precipitation of very low protein concentration 1) To one volume of protein solution, add 1/100 vol. of 2% DOC (Na deoxycholate, detergent). 2) Vortex and let sit for 30min at 4C. 3) Add 1/10 of Trichloroacetic acid (TCA) 100% vortex and let sit ON at 4C (preparation of 100% TCA: 454ml H2O/kg TCA. Maintain in dark bottle at 4C.Be careful, use gloves!!!). 4) Spin 15min 4C in microfuge at maximum speed (15000g). Carefully discharge supernatant and retain the pellet: dry tube by inversion on tissue paper (pellet may be difficult to see). [OPTION: Wash pellet twice with one volume of cold acetone (acetone keep at –20C). Vortex and re-pellet samples 5min at full speed between washes]. 5) Dry samples under vacuum (speed vac) or dry air. For PAGE-SDS, resuspend samples in a minimal volume of sample buffer. (The presence of some TCA can give a yellow colour as a consequence of the acidification of the sample buffer; titrate with 1N NaOH or 1M TrisHCl pH8.5 to obtain the normal blue sample buffer color.) |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
9楼2012-03-26 22:04:27
送鲜花一朵 |
很有帮助！！能不能发一下这种方法的出处啊？（文献或资料）chunqizzm@126.com 还有就是，TCA-DOC方法中DOC（脱氧胆酸钠）起什么作用知道吗？？第4步中OPTION的要用到丙酮是不是必须要这一步啊？ 本来是想再送JB的可是一个人只能送10个！ |
10楼2012-03-27 07:32:48
2楼2012-03-25 23:17:06
3楼2012-03-25 23:43:09
4楼2012-03-26 09:13:32
5楼2012-03-26 09:16:16
7楼2012-03-26 21:42:52
8楼2012-03-26 21:46:56
11楼2012-03-27 11:36:06
12楼2012-03-27 16:14:18
13楼2013-03-29 15:10:30
