应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 纯化出的蛋白没有活性，求教！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 5538  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zoeye

金虫 (小有名气)

[求助] 纯化出的蛋白没有活性，求教！

GST纯化一种磷酸酶
但是做活性却检测不出来
请问要纯化的酶有活性应该注意什么呢？

隔壁实验室的师兄磷酸酶都保存在四度的
说事-20就会失活？ 是这样吗？
我纯完放在-80°的 难道是因为放在-80的原因？
而且我都是超声裂菌的 是不是也会影响酶活啊？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-21 19:21:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoeye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-03-22 21:53:43:
多看看关于磷酸酶的文献，特别是磷酸酶性质相关的，能找到关键点。比如是否有一些离子或物质抑制这个酶的活性，是否需要加入一些物质才有活性（有的金属酶需要加入金属离子构成活性中心才有活性的），失活的条件， ...

谢谢你的建议 我去查文献了
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-22 22:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答问题！ 2012-03-21 20:57:20
如果时间短最好不要放-80，一冻一融很容易沉淀和变性失活的，要放-20或-80加点甘油要好些，一般一两周就放4度，纯化完，标签切除后就应该马上测活性。做蛋白一定要注意能快尽量快，避免失活，影响实验结果。
赞一下 回复此楼
关注我关注的
2楼2012-03-21 20:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zoeye

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-03-21 20:54:02:
如果时间短最好不要放-80，一冻一融很容易沉淀和变性失活的，要放-20或-80加点甘油要好些，一般一两周就放4度，纯化完，标签切除后就应该马上测活性。做蛋白一定要注意能快尽量快，避免失活，影响实验结果。

超声裂解会有活性吗 我已经重新纯了 然后立马测了活性 还是没有
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-22 09:37:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, g鼓励交流！ 2012-03-25 14:11:55
其实你身边就有很好的资源，既然你的隔壁实验室的师兄做过那你跟他请教一下是最好的了，蛋白纯化过程中超声破碎步骤是有可能让蛋白失活的，还有就是最后用高浓度的盐洗脱目的蛋白后要通过超滤等方法降低盐离子的浓度，不然也会影响蛋白活性
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-22 10:09:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085701环境工程求调剂 +7 多久上课 2026-03-27 7/350 2026-03-27 21:07 by 狂炫麦当当
[考研] 085701环境工程，267求调剂 +11 minht 2026-03-26 11/550 2026-03-27 20:52 by 热情沙漠
[考研] 289求调剂 +7 新时代材料 2026-03-27 7/350 2026-03-27 18:08 by arrow8852
[考研] 352分 化工与材料 +3 海纳百川Ly 2026-03-27 3/150 2026-03-27 17:18 by 杨杨杨紫
[考研] 一志愿 西北大学 总分282 英语一62 求调剂 +7 18419759900 2026-03-25 8/400 2026-03-27 16:38 by 18419759900
[考研] 292求调剂 +13 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 14/700 2026-03-27 15:40 by caszguilin
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 303求调剂 +7 安忆灵 2026-03-22 8/400 2026-03-27 11:46 by sanrepian
[考研] 085600材料与化工306 +10 z1z2z3879 2026-03-21 11/550 2026-03-27 11:31 by wangjy2002
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 304材料求调剂 +4 钟llll 2026-03-26 4/200 2026-03-27 03:42 by wxiongid
[考研] 333求调剂 +6 wfh030413@ 2026-03-23 6/300 2026-03-26 22:45 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +9 Mr. Z 2026-03-25 9/450 2026-03-26 10:36 by baoball
[考研] 调剂310 +3 温柔的晚安 2026-03-25 4/200 2026-03-25 23:16 by peike
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 296求调剂 +4 汪！？！ 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪！？！
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭