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zhu_linying

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 29.5
帖子: 16
在线: 7.9小时
虫号: 1698733
注册: 2012-03-17
专业: 环境微生物学

[求助] pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!

我从土壤中提取总DNA，用细菌通用引物F338-GC/R518，最近pcr出来的结果有两条离的很近的带，目的条带很宽，温度梯度都做了55-66，都是有两条很近的带，求高手相助，万分感谢！！

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1楼 2012-03-20 00:16:58

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cnb1987

银虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
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性别: GG
专业: 动物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhu_linying: 金币+1, ★★★★★最佳答案, 我用的就是师姐给的引物，是细菌的通用引物，难道通用引物还不通用还得改么？ 2012-03-20 13:55:44
西瓜: 金币+2, Good！引物设计很重要！ 2012-03-21 17:13:00

童鞋，在PCR的时候你一定要下功夫在引物设计上，我刚开始做的时候也是这种情况，以前用别人设计的引物，怎么扩都扩不出来，扩出来也是你这种情况，引物的特异性不好，现在自己做实验了，自己设计引物，连本科生上手都能扩出来！还有你的体系是什么，是用MIX，还是多组分的，如果体系多的话，可以用不同公司的组份再扩扩！