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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
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zhu_linying

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!

我从土壤中提取总DNA，用细菌通用引物F338-GC/R518，最近pcr出来的结果有两条离的很近的带，目的条带很宽，温度梯度都做了55-66，都是有两条很近的带，求高手相助，万分感谢！！
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1楼2012-03-20 00:16:58
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若水5886

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 赞成！ 2012-03-20 12:03:39
有两条带的原因不在胶或者是上样量大，关键的是你有非特异性条带。
出现这种现象要么是你的引物不够特异，要么就是你的体系或者程序中退火温度有问题啦
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5楼2012-03-20 09:45:37
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rommel1941

铁杆木虫 (正式写手)

情定山河
★ ★
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！欢迎常来哈~ 2012-03-20 12:01:54
建议使用Mg2+浓度，更换电泳缓冲液，将低电压和电泳时间，调整上样量。感觉是有点弥散和拖尾，祝好
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将相本无种★男儿当自强
2楼2012-03-20 09:03:00
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gaoxiang6521

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~ 条带比较小，提高胶浓度是个好办法！ 2012-03-20 12:03:02
marker条带也不清楚。除改变PCR条件和体系外，
建议：
1、调整拍照的焦点和焦距，以MERKER条带清晰为标准；
2、做胶时充分熔解，并倒胶半小时后等完全凝固再拔梳子；
3、提高胶浓度。

另：楼主的marker可是DL2000?
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3楼2012-03-20 09:30:09
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助！ 2012-03-20 12:03:26
建议你跑一下page或者是将PCR产物稀释后作为模板再进行一下PCR
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4楼2012-03-20 09:40:53
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