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zxd95至尊木虫 (著名写手)
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单酶切连接注意事项及洋葱表皮转化试验
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最近准备做蛋白质定位观察和BiFC验证蛋白互作，所使用的载体为pSCYNE和pSCYCE（Waters 2004），其中一个基因（750bp）由于酶切位点限制，只能使用SalI单切，但是做了一次没有成功，请教虫友关于但酶切连接的注意事项。 此外，载体做好后，是要做EYFP的BiFC，准备转化洋葱表皮，由于没有这方面的经验，请虫友们提供一些参考资料或亲身的实验经验。 最后，是我去年8月做了35S:MYB-EYFP和35S:WD40-EYFP的转基因烟草，到现在几代5次了，不知道还能不能看到荧光，RT-PCR是可以检测到的。因为烟草叶片厚，怎样观察才好呢？有没有虫友做过？ |
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