24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1355  |  回复: 3

zxd95

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 单酶切连接注意事项及洋葱表皮转化试验

最近准备做蛋白质定位观察和BiFC验证蛋白互作,所使用的载体为pSCYNE和pSCYCE(Waters 2004),其中一个基因(750bp)由于酶切位点限制,只能使用SalI单切,但是做了一次没有成功,请教虫友关于但酶切连接的注意事项。
       此外,载体做好后,是要做EYFP的BiFC,准备转化洋葱表皮,由于没有这方面的经验,请虫友们提供一些参考资料或亲身的实验经验。
       最后,是我去年8月做了35S:MYB-EYFP和35S:WD40-EYFP的转基因烟草,到现在几代5次了,不知道还能不能看到荧光,RT-PCR是可以检测到的。因为烟草叶片厚,怎样观察才好呢?有没有虫友做过?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

追梦的人
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyu_sdili

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zxd95(金币+2): 有帮助 谢谢! 2012-03-06 10:52:51
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-03-06 10:54:42
我也要做单酶切连接,虽然还没有做,谈一下我的想法吧:第一不妨将载体用磷酸酶处理一下防止载体自连,否则自连应该会比较严重,第二,不知道你片段插入方向对表达有没有影响,如果有影响,应该从重组子中筛选插入方向的正确的~~~~
2楼2012-03-06 09:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxd95

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
: Originally posted by liuyu_sdili at 2012-03-06 09:18:45:
我也要做单酶切连接,虽然还没有做,谈一下我的想法吧:第一不妨将载体用磷酸酶处理一下防止载体自连,否则自连应该会比较严重,第二,不知道你片段插入方向对表达有没有影响,如果有影响,应该从重组子中筛选插入 ...

是的,我的可以PCR检测是否有目的基因的插入,用单酶切XhoI来验证插入片段的正反。
追梦的人
3楼2012-03-06 10:54:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sarah-miao

银虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by zxd95 at 2012-03-06 10:54:19
是的,我的可以PCR检测是否有目的基因的插入,用单酶切XhoI来验证插入片段的正反。...

您好,我想请问下,BIFC质粒系统VN173质粒和VN174质粒你们有么?
4楼2013-05-30 16:02:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zxd95 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856求调剂 +12 zhn03 2026-03-25 13/650 2026-03-29 06:47 by 544594351
[硕博家园] 招收生物学/细胞生物学调剂 +4 IceGuo 2026-03-26 5/250 2026-03-29 01:25 by griffith2014
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工(085600)296求调剂 +12 稻妻小编 2026-03-26 12/600 2026-03-29 01:04 by 我是小康
[考研] 086000生物与医药调剂 +3 Feisty。 2026-03-28 7/350 2026-03-29 00:41 by 544594351
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +7 芋泥小铃铛 2026-03-28 7/350 2026-03-28 21:38 by 小木虫tim
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 5/250 2026-03-28 21:26 by zhq0425
[考研] 一志愿华北电力大学能动专硕,293,求调剂 +3 15537177284 2026-03-23 5/250 2026-03-28 16:11 by xxxsssccc
[考研] 材料与化工考研调剂 +17 孅華 2026-03-22 17/850 2026-03-28 08:35 by WYUMater
[考研] 311求调剂 +3 希望上岸阿小杨 2026-03-23 3/150 2026-03-28 07:57 by 热情沙漠
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +9 丹青奶盖 2026-03-26 10/500 2026-03-28 07:45 by barnett0632
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 286求调剂 +4 lim0922 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:28 by guoweigw
[考研] 327求调剂 +7 prayer13 2026-03-23 7/350 2026-03-26 20:48 by 不吃魚的貓
[考研] 中国科学院深圳先进技术研究院-光纤传感课题组招生-中国科学院大学、深圳理工大学联培 +5 YangTyu1 2026-03-26 5/250 2026-03-26 18:27 by 猫咪猫咪呀
[考研] 297求调剂 +6 田洪有 2026-03-26 6/300 2026-03-26 15:55 by 不吃魚的貓
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
信息提示
请填处理意见