应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
181/2返回列表12下一页
查看: 14559  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

梁小云632

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了

请问各位大侠：
我最近在做4个基因，7个模板的荧光定量PCR，是相对定量，模板间Actin的CT值相差比较大，最低的19最高的26，这样的实验结果能不能用？？？
我用的CDNA没有稀释，稀释过10倍的，actin的CT值在25以上，很高，有什么办法能都解决这个问题？
还有，我怎么确定我的扩增效率，具体应该怎么做？是以一个模板的cDNA做5个数量级的梯度稀释以后，跑一下荧光定量PCR，然后用稀释倍数和CT值做曲线，按公式计算吗？？还有应该用别的方法做啊？？？？？？
谢谢啊？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-02 15:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梁小云632 at 2012-03-02 15:44:12:
非常感谢啊！但是恕我愚昧，我还是不能将此联系到我现在的问题上，我想说，我怎么能求出这个E值，我需要做什么样的实验，还有，我上面描述的稀释倍数+CT值做曲线的方法行得通不？

我也是查的资料，我再去查查，查到了的话就黏贴上来
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-02 16:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liveinearth

新虫 (小有名气)
我也在做相对定量，确定处理前后基因表达的改变。我选的是GAPDH和目的基因检测，ddCT法。
但做之前我需要做GAPDH和目的基因的扩增效率是否一样，即需要稀释样品，先做这两个基因的标准曲线。
我想问高手：做这样的标准曲线，在ABI仪器里选按钮时是按AQ还是RQ stand curve？？
谢谢大家。我是新手，问题比较低级的说。
昨天做了选的是RQ stand curve，仪器并没有标准曲线出来，难道要自己画？谁做过能具体说说操作过程吗
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2012-04-26 10:06:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wenjing120(金币+1): 积极应助！ 2012-03-02 19:37:26
PCR扩增为指数扩增，每一扩增周期后产物的量可以下式表达：
         Yn=Yn-1·(1+E) = Yn-2·(1+E)2=…= X·(1+E)n   
         0≤E≤1            
          其中E表示扩增效率，Yn表示在n个周期后PCR产物的分子数量，Yn-1为n-1个周期后PCR产物的分子数量。
         等式仅在限定的扩增周期数（通常为20或30）内成立。超过此周期数，扩增过程即由指数扩增降低至稳定的扩增速率，最终达到平台，不再扩增.
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-02 15:31:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梁小云632

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-03-02 15:31:18:
PCR扩增为指数扩增，每一扩增周期后产物的量可以下式表达：
         Yn=Yn-1·(1+E) = Yn-2·(1+E)2=…= X·(1+E)n   
         0≤E≤1            
          其中E表示扩增效率，Yn表示在n个周期后PCR产物 ...

非常感谢啊！但是恕我愚昧，我还是不能将此联系到我现在的问题上，我想说，我怎么能求出这个E值，我需要做什么样的实验，还有，我上面描述的稀释倍数+CT值做曲线的方法行得通不？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-02 15:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

【答案】应助回帖

★
梁小云632(金币+1): 2012-03-05 15:07:05
http://www.dxy.cn/bbs/thread/6575244#6575244

http://wenku.baidu.com/view/351fcd1fa76e58fafab003ed.html
看看这些可不可以解决你的问题
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-02 16:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梁小云632

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-03-02 16:54:56:
我也是查的资料，我再去查查，查到了的话就黏贴上来

版主好人啊，谢谢你啊，感激不尽啊
赞一下 回复此楼
6楼2012-03-05 14:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 梁小云632 at 2012-03-05 14:55:53:
版主好人啊，谢谢你啊，感激不尽啊

什么好人啊
RT-PCR对我只是个传说，一度准备做的，后来又一度搁浅了
所以啥都不知道，只是帮忙在网上东看看西找找的弄了点资料而已
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-05 14:58:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梁小云632

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-03-05 14:58:39:
什么好人啊
RT-PCR对我只是个传说，一度准备做的，后来又一度搁浅了
所以啥都不知道，只是帮忙在网上东看看西找找的弄了点资料而已

这个确实能把人折磨疯了!
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-05 15:09:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mizhoulong

木虫 (著名写手)

环境卫生、微生物学
这个纯支持和学习。

只要做定量，设备的软件中这些数据都是自动生成，也就一直没有认真学习过。
赞一下 回复此楼
环境卫生、微生物学、卫生应急
9楼2012-04-16 10:21:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 梁小云632 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +8 家与远方 2026-08-10 13/650 2026-08-11 09:49 by 家与远方
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭