24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 13802  |  回复: 17

wmjqy

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by liveinearth at 2012-04-26 10:06:27:
我也在做相对定量,确定处理前后基因表达的改变。我选的是GAPDH和目的基因检测,ddCT法。
但做之前我需要做GAPDH和目的基因的扩增效率是否一样,即需要稀释样品,先做这两个基因的标准曲线。
我想问高手:做这样的

我们用的是ABI 7500的,坐标曲的时候我们是选用“Quantitation-Relative Standard Curve"模式。做出来都是有标准曲线的。
11楼2012-05-23 21:14:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yygss

金虫 (正式写手)

扩增效率仅仅和基因有关系,选择一个合适浓度的模板依次稀释浓度做标准缺陷,然后就做出扩增效率了,但是扩增你的模板时,要保证扩增圈数在你的标准曲线范围之内。
12楼2012-07-30 10:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

genbaoshao

银虫 (正式写手)

将PCR产物进行TA克隆,然后测序,验证后的质粒进行梯度稀释做标准曲线,如果扩增效率在95%-105%之间的有效,表明扩增效率相同。这个扩增效率是仪器自动给出的结果。
http://photocdn.sohu.com/20050517/Img225595278.jpg
13楼2012-08-11 11:04:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


在罗氏480的软件里,会直接给出扩增效率
14楼2012-09-26 09:37:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

哈库拉马塔塔

新虫 (初入文坛)

学习了
15楼2012-10-30 17:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

石头雪儿

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梁小云632 at 2012-03-02 15:44:12
非常感谢啊!但是恕我愚昧,我还是不能将此联系到我现在的问题上,我想说,我怎么能求出这个E值,我需要做什么样的实验,还有,我上面描述的稀释倍数+CT值做曲线的方法行得通不?...

其实你算的E值是根据你的扩增曲线的回归斜率来算的,E=1/10的-K次方算的
16楼2013-09-03 14:04:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小璜大侠

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-03-02 16:54:56
我也是查的资料,我再去查查,查到了的话就黏贴上来...

佩服!
17楼2015-08-18 10:08:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

猪小乐呀

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by w.king124 at 2012-09-26 09:37:02
在罗氏480的软件里,会直接给出扩增效率

大神?在哪看?
18楼2016-11-10 10:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 梁小云632 的主题更新
信息提示
请填处理意见