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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
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wmjqy

新虫 (初入文坛)
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10楼: Originally posted by liveinearth at 2012-04-26 10:06:27:
我也在做相对定量，确定处理前后基因表达的改变。我选的是GAPDH和目的基因检测，ddCT法。
但做之前我需要做GAPDH和目的基因的扩增效率是否一样，即需要稀释样品，先做这两个基因的标准曲线。
我想问高手：做这样的

我们用的是ABI 7500的，坐标曲的时候我们是选用“Quantitation-Relative Standard Curve"模式。做出来都是有标准曲线的。
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11楼2012-05-23 21:14:58
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yygss

金虫 (正式写手)
扩增效率仅仅和基因有关系，选择一个合适浓度的模板依次稀释浓度做标准缺陷，然后就做出扩增效率了，但是扩增你的模板时，要保证扩增圈数在你的标准曲线范围之内。
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12楼2012-07-30 10:05:32
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genbaoshao

银虫 (正式写手)
将PCR产物进行TA克隆，然后测序，验证后的质粒进行梯度稀释做标准曲线，如果扩增效率在95%-105%之间的有效，表明扩增效率相同。这个扩增效率是仪器自动给出的结果。
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http://photocdn.sohu.com/20050517/Img225595278.jpg
13楼2012-08-11 11:04:00
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w.king124

金虫 (正式写手)
在罗氏480的软件里，会直接给出扩增效率
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14楼2012-09-26 09:37:02
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哈库拉马塔塔

新虫 (初入文坛)
学习了
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15楼2012-10-30 17:02:41
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石头雪儿

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 梁小云632 at 2012-03-02 15:44:12
非常感谢啊！但是恕我愚昧，我还是不能将此联系到我现在的问题上，我想说，我怎么能求出这个E值，我需要做什么样的实验，还有，我上面描述的稀释倍数+CT值做曲线的方法行得通不？...

其实你算的E值是根据你的扩增曲线的回归斜率来算的，E=1/10的-K次方算的
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16楼2013-09-03 14:04:35
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小璜大侠

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-03-02 16:54:56
我也是查的资料，我再去查查，查到了的话就黏贴上来...

佩服！
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17楼2015-08-18 10:08:48
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猪小乐呀

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by w.king124 at 2012-09-26 09:37:02
在罗氏480的软件里，会直接给出扩增效率

大神？在哪看？
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18楼2016-11-10 10:45:18
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