应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 实验讨论 » 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
52/1返回列表
查看: 13989  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

梁小云632

新虫 (初入文坛)

[求助] 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了

请问各位大侠：
我最近在做4个基因，7个模板的荧光定量PCR，是相对定量，模板间Actin的CT值相差比较大，最低的19最高的26，这样的实验结果能不能用？？？
我用的CDNA没有稀释，稀释过10倍的，actin的CT值在25以上，很高，有什么办法能都解决这个问题？
还有，我怎么确定我的扩增效率，具体应该怎么做？是以一个模板的cDNA做5个数量级的梯度稀释以后，跑一下荧光定量PCR，然后用稀释倍数和CT值做曲线，按公式计算吗？？还有应该用别的方法做啊？？？？？？
谢谢啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-03-02 15:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yygss

金虫 (正式写手)
扩增效率仅仅和基因有关系，选择一个合适浓度的模板依次稀释浓度做标准缺陷，然后就做出扩增效率了，但是扩增你的模板时，要保证扩增圈数在你的标准曲线范围之内。
赞一下 回复此楼
12楼2012-07-30 10:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wenjing120(金币+1): 积极应助！ 2012-03-02 19:37:26
PCR扩增为指数扩增，每一扩增周期后产物的量可以下式表达：
         Yn=Yn-1·(1+E) = Yn-2·(1+E)2=…= X·(1+E)n   
         0≤E≤1            
          其中E表示扩增效率，Yn表示在n个周期后PCR产物的分子数量，Yn-1为n-1个周期后PCR产物的分子数量。
         等式仅在限定的扩增周期数（通常为20或30）内成立。超过此周期数，扩增过程即由指数扩增降低至稳定的扩增速率，最终达到平台，不再扩增.
赞一下 回复此楼
2楼2012-03-02 15:31:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梁小云632

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by tuobaohua at 2012-03-02 15:31:18:
PCR扩增为指数扩增，每一扩增周期后产物的量可以下式表达：
         Yn=Yn-1·(1+E) = Yn-2·(1+E)2=…= X·(1+E)n   
         0≤E≤1            
          其中E表示扩增效率，Yn表示在n个周期后PCR产物 ...

非常感谢啊！但是恕我愚昧，我还是不能将此联系到我现在的问题上，我想说，我怎么能求出这个E值，我需要做什么样的实验，还有，我上面描述的稀释倍数+CT值做曲线的方法行得通不？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-02 15:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tuobaohua

荣誉版主 (文坛精英)

投资理财发言人

优秀版主

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梁小云632 at 2012-03-02 15:44:12:
非常感谢啊！但是恕我愚昧，我还是不能将此联系到我现在的问题上，我想说，我怎么能求出这个E值，我需要做什么样的实验，还有，我上面描述的稀释倍数+CT值做曲线的方法行得通不？

我也是查的资料，我再去查查，查到了的话就黏贴上来
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-02 16:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭