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susanuse

银虫 (小有名气)

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专业: 细胞信号转导

[求助] 细胞稳定转染，质粒的设计

小女子最近刚接触质粒。想请问，以下问题：
1，我想让我的目的蛋白在细胞中表达的同时，同时表达GFP，在不表达目的蛋白时，不表达GFP，这样的质粒怎么设计？怎么选取质粒？或者用别的载体？？
2，目的蛋白在细胞中的总表达量不受改变。就是说在以后的刺激试验中，该增加蛋白表达的时候增加，该减小的时候减小，不受转染影响。
3，我希望能稳定转染，建立永久的细胞系。

有没有哪位大侠能帮我解答一下。没坐过分子克隆方面的试验，一窍不通。谢谢指导

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1楼2012-02-17 10:49:05

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ixido

木虫 (小有名气)

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专业: 生物化学

amisking(金币+5): 鼓励积极应助！ 2012-02-17 18:28:57

1 除了楼上的方法外，楼主可以找一下pEGFP的载体，这个载体自身带有EGFP序列，并且可以在EGFPN端或者C端插入目的蛋白
2 这个问题不大明白，不知道楼主想要什么样的结果
3 筛选稳定细胞系，这个取决于你真核细胞表达载体上带有什么样的筛选基因。只要将质粒转染进细胞，然后按照筛选的条件和抗生素类型进行筛选就行了。但是周期很长，而且不一定能筛选出来。