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susanuse

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞稳定转染,质粒的设计

小女子最近刚接触质粒。想请问,以下问题:
1,我想让我的目的蛋白在细胞中表达的同时,同时表达GFP,在不表达目的蛋白时,不表达GFP,这样的质粒怎么设计?怎么选取质粒?或者用别的载体??
2,目的蛋白在细胞中的总表达量不受改变。就是说在以后的刺激试验中,该增加蛋白表达的时候增加,该减小的时候减小,不受转染影响。
3,我希望能稳定转染,建立永久的细胞系。

有没有哪位大侠能帮我解答一下。没坐过分子克隆方面的试验,一窍不通。谢谢指导
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ixido

木虫 (小有名气)

amisking(金币+5): 鼓励积极应助! 2012-02-17 18:28:57
1 除了楼上的方法外,楼主可以找一下pEGFP的载体,这个载体自身带有EGFP序列,并且可以在EGFPN端或者C端插入目的蛋白
2 这个问题不大明白,不知道楼主想要什么样的结果
3 筛选稳定细胞系,这个取决于你真核细胞表达载体上带有什么样的筛选基因。只要将质粒转染进细胞,然后按照筛选的条件和抗生素类型进行筛选就行了。但是周期很长,而且不一定能筛选出来。

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8楼2012-02-17 16:10:58
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