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syn1985

木虫 (正式写手)

[求助] 求助链霉菌基因敲除同源重组的方法

我之前用in frame deletion方法构建了基因敲除载体 然后将载体用结合转移的方法转到链霉菌中去了,长出了很多接合子,但是我做传代后挑10个克隆 用PCR鉴定全为野生型,我也抑郁,不知道怎么办
我想重新构建敲除载体,在中间加上抗生素的筛选标记,但是又担心抗生素加进去后会产生极性效应,所以很苦恼,老板催的紧,做不出来就被骂,很抑郁,
大家有没有什么好的建议啊 我该怎么办啊
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boxiaofen

铜虫 (初入文坛)

好好搞科研
2楼2014-03-18 14:17:08
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