24小时热门版块排行榜    

查看: 2212  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

刘仕博

金虫 (著名写手)

[求助] 在克隆的时候你遇见过这样的问题吗?

最近在做RACE的克隆,有两个基因的5‘断在PCR的时候只有400bp左右的长度,回收产物做克隆之后菌液的序列长度就变成了1000多,拿去测序的结果却什么都没有,上游引物和下游引物中间就只有个AC,连续做了两次结果都是一样的,请问这是什么原因造成的呢?
回复此楼
生命在于折腾~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引物扩过质粒吗?污染了吗?
jiayoubashaonian
4楼2012-02-02 14:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

amilie030312

金虫 (正式写手)

载体多长,是不是没连上空载啊
2楼2012-02-02 12:59:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流! 2012-02-02 18:31:13
这个应该是没连上,也就是实验失败了。
这种情况我遇到过,酶切鉴定跟我的片段一样大小,可是拿去测序测出来什么都不是。
你的测序引物没什么问题的话就重新做吧。
重点检查一下你的感受态,以及你的纯化试剂盒。都没问题的话,直接拿你的PCR回收产物去测序吧,看一下是不是一个错配片段。
好运。
3楼2012-02-02 13:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hooter86

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议重新做一遍吧 ,很可能是你在扩增目的片段时出现问题了
5楼2012-02-02 16:57:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 明天应该可查了!? +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +7 scalable 2026-08-24 7/350 2026-08-24 23:01 by anata1209
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +7 图啦图啦 2026-08-24 8/400 2026-08-24 22:00 by maomao_da
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +14 ziyangfang 2026-08-19 17/850 2026-08-24 18:37 by 哈哈蛤?
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
请填处理意见