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bffgbgff

新虫 (小有名气)

[求助] 溶解曲线的问题

我做的realtime-PCR,1-4号模板P其他的基因都很好,唯独这个基因溶解曲线不好,相同的引物在不同的模板间溶解曲线不一样。是为什么呢?见图。
不知道哪位前辈遇到过这个问题!
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
西瓜(金币+2, 专家考核): Good! 2012-01-15 11:33:52
相同的引物在不同的模板间溶解曲线不一样。如果是退火温度不一样的话,很有可能是有基因组DNA的污染或是非特异性的扩增,带来的产物不均一。
jiayoubashaonian
3楼2012-01-14 17:53:11
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海阔天空8158

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+5): 欢迎应助,常来啊 2012-01-14 21:34:11
楼主能不能把横坐标一起粘过来啊?这样更有利于确定原因。

一般来说出现小峰的原因包括:
1第四组对应的样品中核酸污染,造成非特应性扩增。
2引物二聚体峰:(可能是在加引物过程中掺杂了其他引物,或者引物浓度的原因)

另外,可以排除一下最后样品中是不是有基因组DNA的污染。

祝实验顺利。
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
2楼2012-01-14 17:38:21
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bffgbgff

新虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by 海阔天空8158 at 2012-01-14 17:38:21:
楼主能不能把横坐标一起粘过来啊?这样更有利于确定原因。

一般来说出现小峰的原因包括:
1第四组对应的样品中核酸污染,造成非特应性扩增。
2引物二聚体峰:(可能是在加引物过程中掺杂了其他引物,或者引物 ...

重复过一次,结果还是这个样子,排除加错引物的可能,PCR完了后跑了个电泳,3,4号样品目的基因很弱,引物二聚体很强。无杂带出现!,十分不解原因。
4楼2012-01-15 14:39:55
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bffgbgff

新虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by blackrose8089 at 2012-01-14 17:53:11:
相同的引物在不同的模板间溶解曲线不一样。如果是退火温度不一样的话,很有可能是有基因组DNA的污染或是非特异性的扩增,带来的产物不均一。

跑电泳,无杂带出现啊。是不是目的基因表达很弱的原因
5楼2012-01-15 14:40:53
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