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缥缈之佳

银虫 (小有名气)

[求助] DNA切割 如图 桥高手指点

我做的 琼脂糖凝胶电泳,如图,0是空白,只有DNA;1是加药10 -5浓度(1微升),2是加药10 -5浓度(5微升),3是加药10 -4浓度(1微升),4是加药10 -4浓度(2微升),5是加药10 -4浓度(3微升),6是加药10 -4浓度(4微升),7是加药10 -4浓度(5微升),8是加药10 -4浓度(6微升),9是加药10 -4浓度(7微升),10是加药10 -4浓度(8微升)     我用的EB显色
如图到最后10时,已经没有条带,我的问题是,
1.这图能否说明药物具有DNA切割作用,或是与DNA的其他作用?
2.若有切割,切碎的条带为何没有显示?
3.如何将消失的谱带显示,哪个地方改进(浓度试了)?
求高手指点


[ Last edited by 缥缈之佳 on 2012-1-3 at 10:51 ]
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GWBST

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-01-03 22:00:13
缥缈之佳(金币+1): 2012-01-04 11:11:42
不能严格说明有降解的作用,也许是浓度被稀释的原因,你在同一体积在增加药物的浓度试试
事在人为
2楼2012-01-03 21:33:29
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hzlatqh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
缥缈之佳: 回帖置顶 2012-01-04 11:16:20
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 很好很强大! 2012-01-04 12:22:39
1.这图能否说明药物具有DNA切割作用,或是与DNA的其他作用?

这些实验还不够,要多做对照,譬如加入同样体积buffer或者溶剂(但不含药),以排除试剂本身是否有降解DNA的污染物或者排除稀释效应。

2.若有切割,切碎的条带为何没有显示?
可能的情况是,你的药能非特异性的切割DNA,这样的话,条带大小不一,各个大小的浓度都很低,自然看不出来。

3.如何将消失的谱带显示,哪个地方改进(浓度试了)?
切割后,测定DNA的浓度或者不跑电泳,而是直接点样,染EB,看能否看到亮斑。同时用该样品平行的做一个电泳,表明原有的DNA的确被切割。
两个黄鹂鸣翠柳,一行白鹭上青天
3楼2012-01-04 00:05:22
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缥缈之佳

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by GWBST at 2012-01-03 21:33:29:
不能严格说明有降解的作用,也许是浓度被稀释的原因,你在同一体积在增加药物的浓度试试

不可能稀释,我加了缓冲液的
4楼2012-01-04 11:11:32
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缥缈之佳

银虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by hzlatqh at 2012-01-04 00:05:22:
1.这图能否说明药物具有DNA切割作用,或是与DNA的其他作用?

这些实验还不够,要多做对照,譬如加入同样体积buffer或者溶剂(但不含药),以排除试剂本身是否有降解DNA的污染物或者排除稀释效应。

2.若有切 ...

第一条考虑到了   
第二三条很感谢
我会再试下的   谢谢
5楼2012-01-04 11:15:49
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