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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 真菌ITS区PCR阴性有目的条带 产物却没条带
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金家女王

铁虫 (小有名气)

[求助] 真菌ITS区PCR阴性有目的条带 产物却没条带

对真菌进行rDNA-ITS区PCR，只有阴性有条带  还是目的条带
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1楼 2011-12-30 20:17:41
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maidmocha

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励应助 2011-12-31 03:54:42
这个问题真的很少出现。
阴性出结果，我想是因为污染的缘故吧。如果能够扩增出来，条带要比你这个阴性上的药亮得多。
PCR产物，你仔细想想你的体系。是不是忘记了加模板。或者是protocol不合适。把protocol发出来，更容易分析。
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2楼2011-12-31 00:26:18
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金家女王

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by maidmocha at 2011-12-31 00:26:18:
这个问题真的很少出现。
阴性出结果，我想是因为污染的缘故吧。如果能够扩增出来，条带要比你这个阴性上的药亮得多。
PCR产物，你仔细想想你的体系。是不是忘记了加模板。或者是protocol不合适。把protocol发出 ...

模板是加了的  重复了很多遍  结果都一样  如果污染的话为什么加了模版的区域没有条带出现
体系：
10×buffer 2ul；
dNTP        0.8
ITS1         0.4
ITS4         0.4
Taq          1.2
ddH2O      15.2
模板       1

循环体系
94°  4min;94°  45s，58°  45s，72°  90s；72°  7min。  35C
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3楼2011-12-31 11:02:38
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njuzhangxin

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2012-01-01 10:44:39
金家女王(金币+3): ★有帮助 好吧 为了第一个帮助我的人。。。 2012-01-06 16:09:01
引用回帖:
3楼: Originally posted by 金家女王 at 2011-12-31 11:02:38:
模板是加了的  重复了很多遍  结果都一样  如果污染的话为什么加了模版的区域没有条带出现
体系：
10×buffer 2ul；
dNTP        0.8
ITS1         0.4
ITS4         0.4
Taq          1.2
ddH2O      15 ...

个人觉得Taq酶量加的太多了，一般0.5 ul就够了。
另对照出条带，个人建议把所有体系都换新的，包括引物重新合成，PCR管用一次性的，用的水去离子水灭菌分装或者买生物公司的。
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4楼2012-01-01 07:43:27
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