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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 大肠杆菌菌落形态请教
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stvmin

银虫 (初入文坛)

[求助] 大肠杆菌菌落形态请教

各位好，本人首次做微生物培养实验，遇到问题，烦请大家解答~

从其他实验室拿到纯大肠杆菌菌种（据说是纯E.Coli菌种）之后，我将其使用肉汤培养基培养后，用无菌水稀释，作为实验使用的大肠杆菌菌液。

之后为检测菌液中大肠杆菌浓度，于是使用营养琼脂培养基培养菌液水样（1mL菌液倒平板）。培养24h后长出如图片的所示菌落。

请各位忽略中间凸起的几块块琼脂，只看菌落。

菌落有些是长在在琼脂表面的，成圆块状，明显，如图左下方的菌落；而更有一部分是生长在在琼脂层内的，更小，呈小芝麻般的粒状，布满了整个琼脂层。。。

请问该两种群落是否代表了两种细菌？哪种才是大肠杆菌呢？还是两种都是？请有经验的虫友回应，谢谢了~

营养琼脂培养基培养产品

[ Last edited by stvmin on 2011-12-29 at 12:23 ]
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1楼 2011-12-29 12:19:27
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wzwhq

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不确定是不是大肠的话就做个革兰氏染色和生化试验，不过看样子应该是大肠，以后做的话多稀释一下，菌数范围在30-300内有效
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stvmin
6楼2011-12-29 14:41:58
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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scelab(金币+2): 谢谢热心回复~ 2011-12-29 12:45:25
你做多久实验了兄弟？倾注法本来就是这样的，内层也可能生长啊，内层不一定是无氧环境。想得到形态好的菌落，多稀释几个梯度吧。你倾注的琼脂都凝了。
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2楼2011-12-29 12:26:15
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wjf008

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

大肠杆菌的菌落比较湿润，看着像，你可以做一下革兰氏染色，阴性的话基于菌种的来源基本确定是大肠。如果想确定只能做生化试验了。
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stvmin 大漠风云
7楼2011-12-29 14:42:36
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zhaohp85

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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zhang8826857(金币+3): 鼓励新虫 2011-12-29 16:51:15
1.你倒板时琼脂已经凝固了或者是倒完板后琼脂未充分凝固你就倒扣培养了
2.应该设空白对照。
3.看菌落形态像大肠杆菌。具体确认需要染色镜检和生化鉴定
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stvmin
8楼2011-12-29 15:32:19
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木叶凌波

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+1): 鼓励应助 2012-01-09 11:07:37
现在鉴定是不是大肠，不就测个16s的事吗
菌落PCR一下送测序，30块钱搞定，保证准确，生化鉴定麻烦又费时
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stvmin
gotowardswhatyouareafraidof,tounderstandthatitcan'thurtyou
10楼2011-12-29 17:14:12
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MagicWoods

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
stvmin(金币+10): 嗯嗯，谢谢你呢~ 2011-12-30 20:51:37
zhang8826857(金币+5): good 2011-12-30 21:18:23
仅从形态很难判断是否为同一株菌的，除非一些表型特征差异特别大，比如一个产色素，另一个菌落不产色素等。要想鉴别是否为同一菌，用大肠杆菌的特征引物去扩增检测就好了，比如你的大肠杆菌具有哪个抗性基因，用那个抗性基因的引物去验证，一般情况下不会有那么凑巧，正好污染菌也具有相同的抗性。如果要想准确鉴定是否为大肠杆菌，除了PCR扩增16S外，还需要一些基本的生理生化特性加以判别，16S基因序列不能100%保证区别到种，不过鉴定到属是没问题的。
PS:楼主的细菌计数方法很不科学，是否可以改进下呢？综合楼上几位所说，平板计数法只有在一个平板上的菌落数在30~300个才被广泛接受认为是准确的。如果大概的数量可以用OD值来判断，测定一下吸光值，然后就能估计对应的数量就出来了。仅供参考~~
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11楼2011-12-30 15:50:17
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94394220

金虫 (正式写手)
都是大肠，在表面生长的话，因为没有受到空间的限制，所以呈圆形，光滑。如果是在琼脂内部生长的话，就会呈现一定角度的菱形、或者不规则的多角形。这个不是两种不同的形态，而是由于不同的生长空间限制所造成的不同表观。
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20楼2012-01-10 09:24:49
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cuijinmiss

铜虫 (初入文坛)
大肠杆菌是兼性厌氧菌，所以在有氧和无氧的环境里都能生长，但在有氧时生长较好，无氧时仅维持生存。所以表面的菌落要大些，培养基内的菌落较小。关于稀释度的问题已有高人支招，故不在此赘述。
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27楼2014-05-27 17:30:13
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普通回帖

hong_31

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是涂布培养还是倾注培养啊
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tobeabetterman
3楼2011-12-29 13:02:39
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stvmin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hong_31 at 2011-12-29 13:02:39:
你是涂布培养还是倾注培养啊

谢谢你哈~
是混合菌液倾注培养的~
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4楼2011-12-29 13:59:50
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stvmin

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjf008 at 2011-12-29 12:26:15:
你做多久实验了兄弟？倾注法本来就是这样的，内层也可能生长啊，内层不一定是无氧环境。想得到形态好的菌落，多稀释几个梯度吧。你倾注的琼脂都凝了。

谢谢你啊~
我第一次做，所以不太懂~
那图片所示的菌落都是大肠杆菌菌落吗？
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5楼2011-12-29 14:01:55
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hong_31

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stvmin at 2011-12-29 13:59:50:
谢谢你哈~
是混合菌液倾注培养的~

倾注培养的话你说的现象是正常的，但是稀释倍数不够，平板计数菌落数最好30-300之间。
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stvmin
tobeabetterman
9楼2011-12-29 16:41:20
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