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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 大肠杆菌菌落形态请教
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花花流氓兔

银虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by 94394220 at 2012-01-10 09:24:49
都是大肠，在表面生长的话，因为没有受到空间的限制，所以呈圆形，光滑。如果是在琼脂内部生长的话，就会呈现一定角度的菱形、或者不规则的多角形。这个不是两种不同的形态，而是由于不同的生长空间限制所造成的不同 ...

同学你好，请问你一下，长在琼脂内部的参不参与计数呢？
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两年
21楼2012-05-31 08:54:36
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luna700

新虫 (初入文坛)
如果是灌注法，应该都是大肠。
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22楼2012-07-25 16:11:09
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
引用回帖:
2楼: Originally posted by wjf008 at 2011-12-29 12:26:15
你做多久实验了兄弟？倾注法本来就是这样的，内层也可能生长啊，内层不一定是无氧环境。想得到形态好的菌落，多稀释几个梯度吧。你倾注的琼脂都凝了。

请问倾注法怎么能提高重复性！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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23楼2013-08-15 16:07:29
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
引用回帖:
11楼: Originally posted by MagicWoods at 2011-12-30 15:50:17
仅从形态很难判断是否为同一株菌的，除非一些表型特征差异特别大，比如一个产色素，另一个菌落不产色素等。要想鉴别是否为同一菌，用大肠杆菌的特征引物去扩增检测就好了，比如你的大肠杆菌具有哪个抗性基因，用那个 ...

请问你做过菌落计数吗？如何得到重复性好的结果？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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24楼2013-08-15 16:10:12
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MagicWoods

银虫 (小有名气)
引用回帖:
24楼: Originally posted by hxswdl at 2013-08-15 16:10:12
请问你做过菌落计数吗？如何得到重复性好的结果？
...

你好，菌落计数是微生物专业最基本的实验技能之一，方法很多种，最为大家认可和接受的方法之一就是平板计数法，按照该方法的标准进行操作，重复性会比较好的，关键点是预计菌浓度，将菌倍数稀释，连续涂布3个梯度的菌稀释液，每个梯度涂布3个平板，目的就是要将菌落数30~300个的平板能有效落在你涂布的平板中，而且同一个浓度梯度的重复性是比较好的，如果不好，那是涂布技术有问题！特殊菌需要特殊处理，比如一些粘附性很强的菌，或许需要加一些吐温80来离散细菌。总而言之，只要熟练操作，平板计数法的重复性是比较好的，经过无数次的验证，屡试不爽！当然平板涂布法有其局限性，比如死菌是计算不出来的，那么还有其他方法可以弥补，显微计数法就是之一，经染色的菌是可以在显微镜油镜下计数的。另外还有吸光光度法，荧光定量法等等。
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hxswdl
25楼2013-08-23 12:48:04
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hxswdl

至尊木虫 (文坛精英)

Tortoise

文献杰出贡献
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引用回帖:
25楼: Originally posted by MagicWoods at 2013-08-23 12:48:04
你好，菌落计数是微生物专业最基本的实验技能之一，方法很多种，最为大家认可和接受的方法之一就是平板计数法，按照该方法的标准进行操作，重复性会比较好的，关键点是预计菌浓度，将菌倍数稀释，连续涂布3个梯度的 ...

非常感谢您的回复！！我是分子方向的，现在做大肠杆菌BL21（DE3）的平板计数，使用过玻璃珠涂布，玻璃棒涂布，倾注法，做预实验时重复性还算可以，做5个重复，误差4个在±5%以内，但有一个误差甚至超过20%，请问如果是技术问题，主要是哪些地方容易引起这么大的误差？
      另外，梯度稀释过程的误差有没可能消除？我同一瓶菌，梯度稀释2次之后差异甚至可以超过50% 。如果有，请问要注意些什么？ 很急！再次多谢您！！
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26楼2013-08-23 18:27:04
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cuijinmiss

铜虫 (初入文坛)
大肠杆菌是兼性厌氧菌，所以在有氧和无氧的环境里都能生长，但在有氧时生长较好，无氧时仅维持生存。所以表面的菌落要大些，培养基内的菌落较小。关于稀释度的问题已有高人支招，故不在此赘述。
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27楼2014-05-27 17:30:13
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大漠风云

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaohp85 at 2011-12-29 15:32:19
1.你倒板时琼脂已经凝固了或者是倒完板后琼脂未充分凝固你就倒扣培养了
2.应该设空白对照。
3.看菌落形态像大肠杆菌。具体确认需要染色镜检和生化鉴定

你好，染色镜检，需要哪些试剂，能否大概讲解一下过程。一看您在这方面就很有经验，谢谢！
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28楼2015-05-29 14:20:42
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大漠风云

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by zhaohp85 at 2011-12-29 15:32:19
1.你倒板时琼脂已经凝固了或者是倒完板后琼脂未充分凝固你就倒扣培养了
2.应该设空白对照。
3.看菌落形态像大肠杆菌。具体确认需要染色镜检和生化鉴定

您好，染色镜检和生化鉴定如何做？能否大致讲解一下过程，谢谢！
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29楼2015-05-29 14:21:53
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大漠风云

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by wjf008 at 2011-12-29 14:42:36
大肠杆菌的菌落比较湿润，看着像，你可以做一下革兰氏染色，阴性的话基于菌种的来源基本确定是大肠。如果想确定只能做生化试验了。

您好！革兰氏染色怎么做？麻烦告知一下需要什么试剂，大致怎么操作，谢谢您！
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30楼2015-05-29 14:23:37
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