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baby1_9253344金虫 (小有名气)
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帮忙评价一下PCR引物
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模板基因210bp，想要通过菌落pcr把模板基因P出来，设计的上下游引物自己加了酶切位点和保护碱基，初次设计引物，自己摸索着用oligo 评价了一下，但是出来的指标不知道是好是坏，贴出来请大家帮忙评价一下。 上游引物（33bp）：5‘-GGGAATTC+NedI酶切位点+...... 下游引物（27bp）： 5’-GCC+HindIIII酶切位点+...... 上下游引物不一样长，可以吗？如果要补成一样长，是增加保护碱基这边，还是从3端延长？谢谢各位啦~   |
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2楼2011-12-27 19:13:41
baby1_9253344
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3楼2011-12-28 10:03:10
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4楼2011-12-28 20:30:21
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wanhscn(金币+2): 感谢应助，欢迎继续回答 2011-12-29 08:54:04
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| 引物不需要一样长，我凑合着用师兄剩的引物与自己的引物一起，差了近10个碱基都可以P出来，结果还是很稳定的。你的TM值貌似是有点高了，但是问题也不会很大。不过你的引物末端两个碱基编码的氨基酸不是保守的，估计会有一定概率出错（如果不用高保真的话），但是后面多挑几个单克隆就好了。模板基因应该是在菌的基因组上吧？不知道P起来有没有什么不一样的。 |
5楼2011-12-29 00:09:23
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8楼2011-12-29 09:25:59
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